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CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H2S的表达影响
目的 观察胱硫醚γ裂解酶(CSE)siRNA转染人脐静脉内皮EAhy926细胞后CSE的表达及对H2S的影响.方法 体外培养EAhy926细胞,经siRNA转染以沉默CSE基因表达,分为5组进行培养:正常对照组(A组):只加入转染试剂;阴性对照组(B组):转染Neg-siRNA;转染CSEsiRNA1组(C组);转染CSEsiRNA2组(D组);转染CSEsiRNA3组(E组).采用Lipofectamine 2000介导转染EAhy926细胞,在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率;Western blot法检测CSE蛋白表达;收集细胞检测H2S含量.结果 观察转染效率为60%左右;A组CSE蛋白表达为(153.41±23.43),B组24 h CSE蛋白表达为(150.22±17.56),而D组24 h CSE蛋白表达降至(59.43±21.81),差异有统计学意义(P<0.01);并且A组H2S含量为(0.96±0.05),B组24 h H2S含量为(0.95±0.06),D组24 h H2S含量降至(0.54±0.08),差异有统计学意义(P<0.01).结论 CSEsiRNA能够有效地抑制EAhy926中CSE的表达,并且CSEsiRNA2沉默作用强.
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登革病毒2型诱导人血管内皮细胞株EAhy926自噬的研究
[目的]探讨登革病毒2型(DV2)感染人静脉血管内皮细胞株EAhy926对细胞自噬的影响.[方法]同一批EAhy926细胞分成对照组和感染组,感染组在DV2感染EAhy926细胞后12、24、36、48 h分别收集细胞,用流式细胞仪检测发生自噬的细胞百分率与酸性自噬泡的平均荧光密度,对照组相应时间点收集细胞做同样处理作为对照.实验重复5次,用方差分析和配对t检验进行统计分析.[结果]感染组4个时间点自噬的细胞百分率和酸性自噬泡的平均荧光密度较对照组相应时间点均有升高(P＜0.05).48 h对照组和感染组自噬细胞的百分率和酸性自噬泡平均荧光密度差异明显.对照组4个时间点自噬细胞百分率(％)分别为:70±7,72±6,71±8和69±10；感染组则为75±3,78±3,77±5,80±7.对照组4个时间点酸性自噬泡平均荧光密度分别为:36.4±3.4,37.0±3.3,35.8±2.3,34.4±3.2,感染组则为41.1±2.3,45.0±4.8,41.3±3.3,44.5±7.5.[结论]DV2能诱导EAhy926细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究.
