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体外感染实验探讨丙型肝炎病毒的ADE分子机制
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)在感染人滋养层细胞的过程中是否存在抗体依赖性感染增强(ADE)作用,以探讨HCV母婴传播的分子机制.方法 将HCV阳性血清以4种不同方式感染人滋养层细胞,以免疫电镜观察HCV病毒颗粒在滋养层细胞中的表达,应用RT-PCR法、免疫组化法检测细胞内外的HCV RNA正链、负链,HCV NS5、NS3及C区抗原.结果 在滋养层细胞胞浆内发现了HCV病毒颗粒,HCV RNA正链、负链,HCV NS5、NS3、C区抗原仅在全血清感染细胞内或上清中间断测得.结论 HCV可以在滋养层细胞中复制.HCV感染滋养层细胞的过程中存在ADE机制,抗体和补体均参与了HCV的跨膜转运过程.
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脑源性神经营养因子对人滋养层细胞增殖和侵袭的影响及其机制
目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对人滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将HTR-8/Svneo细胞分成A、B、C组,A组加入1 mL/L DMSO,B组加入5×10-8 g/mL的BDNF,C组加入0.1μmol/L的BDNF络氨酸激酶受体TrkB特异性抑制剂K252a,24 h后转板继续培养.采用CCK8法观察3组细胞继续培养0、24、48及72 h时的细胞增殖能力(以OD 450表示),采用Transwell实验观察3组细胞继续培养24 h时的侵袭能力(以穿膜细胞数表示),采用Western blotting法检测3组细胞继续培养24 h时磷酸化TrkB(p-TrkB)和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR).结果 继续培养48、72 h时B组细胞OD 450均高于A组(P均<0.05),C组细胞OD 450均低于A组(P均<0.05).A、B、C组穿膜细胞数分别为(42±4)、(87±6)、(29±3)个.B组细胞穿膜细胞数多于A组(P<0.05),C组细胞穿膜细胞数少于A组(P均<0.05).与A组相比,B组细胞p-TrkB、p-Akt、p-mTOR蛋白表达量均升高(P均<0.05),C细胞p-TrkB、p-Akt、p-mTOR表达量均降低(P均<0.05).结论 BDNF可以增强人滋养层细胞HTR-8/Svneo增殖和侵袭能力,其机制可能与其活化PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
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HCV感染人滋养层细胞过程中抗体依赖性增强作用的初步研究
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)在感染人滋养层细胞的过程中是否存在抗体依赖性感染增强(ADE)作用,探讨HCV母婴传播的分子机制.方法 将HCV阳性血清以4种不同方式感染体外培养人滋养层细胞,应用RT-PCR法对标本进行HCV RNA定性检测,并进一步评估不同浓度CD16单抗对感染过程的阻断作用.此外,应用免疫电镜技术观察滋养层细胞感染HCV病毒颗粒情.结果 HCV RNA在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本均为阳性表达,且平均拷贝数较高,在FcγRⅢ(CD16)单抗阻断组多个标本内未能检测到HCV RNA的表达,且阳性标本拷贝数较低;CD16单抗对感染的阻断作用随浓度的升高而增强;在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本细胞内可间断测得未脱壳的HCV病毒颗粒,CD16单抗阻断组细胞内未能检出.结论 滋养层细胞膜CD81和LDL-R分子不参与HCV感染滋养层细胞的过程,而FcγRⅢ分子则与此过程密切相关.HCV感染人滋养层细胞过程中存在抗体依赖性增强作用.
关键词： 丙型肝炎病毒 抗体依赖性感染增强作用 母婴传播 人滋养层细胞 体外感染
