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重组人促卵泡激素研究进展
重组人促卵泡激素(rhFSH)是目前人类辅助生殖技术中常用的药物.由于糖基化作用的原因,原核表达系统难以生产出rhFSH.迄今为止,全球仅有两家公司的rhFSH药物上市.rhFSH高表达细胞株的构建、蛋白产量的提高以及糖基化的均一性是目前需要重点解决的问题.本文综述了rhFSH及其突变体的研发现状和未来的发展趋势,为后续的重组卵泡刺激素研究奠定基础.
关键词： 重组人促卵泡激素(rhFSH) rhFSH突变体 研究进展 -
重组人促卵泡激素(rhFSH)制剂的SDS-PAGE/Western blot鉴别方法研究
目的:建立可用于不同剂型重组人促卵泡激素(rhFSH)产品质量控制的特异性SDS-PAGE/Western blot鉴别方法.方法:用SDS-PAGE电泳分离由不同生产企业生产的小同剂型rhFSH产品,通过半干电泳将凝胶上的待测蛋白转移至硝酸纤维素膜(NC膜),采用特异性抗体在NC膜上进行免疫杂交.通过检测灵敏度、线性和专属性试验,进行方法学考察.结果:对rhFSH特异性检测灵敏度可达5 ng;对3个厂家生产的3种注射液、1种注射用冻干制剂检测,均可得到阳性结果,且试验结果不受不同剂型中的防腐剂、稳定剂和其他辅料干扰;用本法对等的其他重组糖蛋白激素如重组人促黄体激素(rhLH)、重组人绒促性素(rhCG)测定结果均为阴性.结论:本方法灵敏度高、专属性强,可作为rhFSH的特异性鉴别方法,用于不同剂型rhFSH产品的质量控制.
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柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖
目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中的单糖.方法:采用20%TFA水解rhFBH,释放单糖,用邻氨基苯甲酸衍生化,采用反相高效液相色谱法测定.色谱柱为Jupiter C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A为含0.15%正丁胺、0.25%磷酸、0.5%四氢呋喃的水溶液,流动相B为流动相A与乙腈比例为1∶1的溶液,梯度洗脱,流速0.85 mL·min-1;柱温30℃;荧光检测器:激发波长为230 nm,发射波长为425 nm.结果:葡萄糖胺、半乳糖、甘露糖、岩藻糖进样量分别在0.39～3.94 nmol(r=0.9994),0.29～5.85 nmol(r=0.9998),0.24～4.90 nmol(r=0.9998),0.05～1.03nmol(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系.平均加样回收率(n=9)分别为104.1%,104.2%,104.2%,98.0%;RSD分别为9.3%,1.8%,0.61%,6.0%.结论:该方法灵敏,专属性强,重复性好,可定量测定重组人促卵泡激素中的单糖.
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促卵泡激素体内生物活性测定及其各国药典方法比较
目的:基于长期大量实验数据,对各国药典促卵泡激素(FSH)生物活性测定方法进行梳理、比较.方法:对中国药典2010年版(ChP 2010) FSH生物测定法优化,测定国内外多批重组人促卵泡激素(rhFSH)、尿源FSH及复方rhFSH-rhLH产品的体内生物活性,并就动物数、大鼠体重、溶媒中HCG含量、给药剂量、反应值等与EP7.0和USP 35-NF 30的FSH的生物测定方法进行对比,梳理其异同.结果:ChP 2010每组8只动物与EP7.0和USP 35-NF 30每组5只动物,计算效价结果总平均偏差率为2.3％,总平均可信限率由21.2％升至28.7％,都在生物测定误差允许范围内.ChP 2010规定雌大鼠出生19～23 d,体重36～50g,体重偏小,实验灵敏度差,体重36 ～40 g的大鼠卵巢增重明显小于40 ～50 g的空白组卵巢增重(p＜0.05);溶媒中HCG含量也偏低;给药剂量与EP7.0和USP 35-NF 30相近;卵巢重作为反应值与EP7.0和USP 35-NF 30器官系数作为反应值不同,两者测定结果间差异无显著性意义.结论:每组5只大鼠即可满足实验要求,减少实验动物用量(3R原则).大鼠出生21 ～23 d,体重应为40～60 g(大相差10 g内),溶媒中HCG含量适当增加至25～30 IU·mL-1为佳FSH生物测定实验条件,优化ChP2010的FSH生物测定法.
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重组人促卵泡激素低剂量递增方案联合宫腔内人工授精临床分析
目的:探讨重组人促卵泡激素(rhFSH)低剂量递增方案联合宫腔内人工授精(IUI)临床效果及卵巢反应预测因子.方法:选择多囊卵巢综合征、WHO Ⅱ型排卵障碍及不明原因不孕患者60例,采用rhFSH(果纳芬)低剂量递增方案促排卵联合IUI,分析妊娠率、多胎妊娠率、卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率,并对卵巢反应预测因子加以分析.结果:①临床妊娠率28.21％,双胎妊娠率9.09％,流产率18.18％,促排卵过程中发生OHSS(轻度)l例,无三胎及以上妊娠.②促排卵成功患者与卵巢反应不良患者在体质量、体质量指数(BMI)、窦卵泡数(AFC)、rhFSH总剂量比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:rhFSH低剂量递增方案可以使排卵障碍特别是对其他促排卵药物抵抗患者获得较好的妊娠结局,促排卵结局可能受患者体质量、BMI、AFC等因素影响.
