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重组HSP65-6P277乳酸乳球菌疫苗对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用
探讨表达HSP65-6P277蛋白的乳酸乳球菌活载体疫苗对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用及可能的作用机制.采用多次小剂量腹腔注射STZ建立1型糖尿病模型.将诱导型表达菌株Lactococcus lactis NZ9000 pCYT:HSP65-6P277和组成型表达菌株L lactis NZ9000 pHJ:HSP65-6P277及无关蛋白对照菌株L lactis NZ9000 pCYT:Nuc灌胃1型糖尿病小鼠(2×109CFU,200 μL),每天灌胃1次,连续7d,之后每周灌胃1次,持续16周.每月从小鼠眼眶静脉丛取血1次,血糖检测仪检测STZ造模小鼠血糖水平并称体重.4个月后将小鼠处死,取小鼠脾脏做脾细胞增殖实验,采用ELISA试剂盒分别检测脾细胞上清液中的IL-10和IFN-γ细胞因子水平以及血清IgG抗体水平.结果显示,与对照组相比,pCYT:HSP65-6P277组和pHJ:HSP65-6P277组可以一定程度上降低STZ造模小鼠血糖水平(P＜0.05),并能维持其正常体重稳定,降低脾细胞针对HSP65和P277的增殖(P＜0.05),脾细胞上清液中IFN-γ细胞因子水平明显降低(P＜0.05),血清IgG抗体水平无明显差异(P＞0.05).
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鼻粘膜免疫融合蛋白Hsp65-6×p277预防NOD小鼠1型糖尿病的发生
目的:提高多肽p277的免疫原性,从而提高其对自身免疫性糖尿病的预防作用.方法:将p277 6次重复与Hsp 65融合置于pET28a中构建重组Hsp 65-6×p277表达质粒.该重组质粒在大肠杆菌BL21中以高效可溶形式表达.依次通过细胞裂解、硫酸铵沉淀、双蒸水透析、DEAE纤维素52柱层析纯化获得目的蛋白.用纯化后的融合蛋白Hsp 65-6×p277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠.每月眼角取血,检测抗体和血糖浓度.结果:初步药效学实验表明融合蛋白Hsp 65-6×p277可抑制NOD小鼠中1型糖尿病的发生.结论:融合蛋白Hsp 65-6×p277有可能发展成为一种具有防治胰岛素依赖性糖尿病作用的疫苗.
