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新型抗血小板多肽类药物研究进展
抗血小板治疗在血栓性疾病的防治中发挥重要作用,血小板膜糖蛋白GP Ⅱb/Ⅲa受体的活化是血小板聚集的终共同通路.目前的研究发现,多种新型多肽能与GP Ⅱb/Ⅲa受体特异性结合,从而发挥抗血小板聚集的药理作用.分类综述含有或类似RGD序列和非RGD序列的新型抗血小板多肽类药物研究进展.
关键词： 抗血小板多肽 RGD序列 GP Ⅱb/Ⅲa受体 血小板聚集 血栓性疾病 -
血小板相关活性肽的研究进展
血小板活化、聚 集是诱导血管内血栓形成的重要因素,因此,抗血小板治疗在心脑血管疾病的防治中至关 重要.然而,现有抗血小板药物虽能降低血栓事件发生,但由于存在抵抗或低应答,不良缺 血事件仍有发生;且这些药物产生的消化道大出血、脑出血等并发症严重影响治疗及预 后.因此,血小板功能研究及新型抗血小板药物研发仍尤为重要.目前研究发现,多种生 物活性肽存在抗血小板活化、聚集等作用.本综述旨在探讨血小板相关活性肽的研究进 展.
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重组抗血小板多肽在Cos-7细胞中的表达、纯化和活性检测
目的 克隆并在Cos-7细胞中表达有活性的抗血小板多肽.方法 合成编码抗血小板多肽赖氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(KGD)的核苷酸序列并克隆于pCDNA3.1/myc-hisB载体,构建重组表达载体pcD -NA3.1-KGD.以lipofectamine 2000将重组表达载体转染Cos-7细胞,G418筛选抗性细胞克隆.裂解细胞并抽提胞内蛋白,采用融合表达的myc多肽表位抗体,通过Western blot检测目的蛋白的表达.大量扩增高表达KGD融合蛋白的抗性细胞克隆,ProBondTM系统纯化KGD融合蛋白.应用血小板凝聚仪和应用流式细胞仪测定KGD多肽抗血小板活性.结果 成功构建KGD表达载体pcDNA3.1-KGD,该载体转染Cos-7细胞经G418筛选获得5株抗性细胞克隆,Western blot显示其中2株细胞很好表达KGD融合蛋白.ProBond试剂纯化KGD融合蛋白,获得纯度为94.6％的融合蛋白.KGD均能通过占据GPⅡb/Ⅲa受体而抑制血小板聚集.结论 在Cos-7细胞中可大量表达并获得高纯度有活性的抗血小板多肽KGD融合蛋白.
