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Mash-1基因过表达对脑创伤后C57 BL/6成年雄性小鼠神经细胞增殖、分化及学习、记忆功能的影响
目的 观察Mash-1基因过表达对脑创伤后C57BL/6成年雄性小鼠神经细胞增殖、分化及学习、记忆功能的影响.方法 将160只健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、单纯创伤组、阴性对照组和过表达组.利用重组腺病毒Ad5-mMash-1进行基因转染.于脑创伤前1 d和脑创伤后1 d、3 d、7 d、14 d采取RT-PCR检测Mash-1 mRNA水平,Western blotting检测Mash-1蛋白表达,水迷宫评价学习和记忆功能.采用免疫荧光法检测脑创伤后3d和7d神经细胞增殖情况.结果 与假手术组比较,单纯创伤组与阴性对照组脑创伤后1 d、3 d、7 d和14 d Mash-1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05～0.01),过表达组脑创伤后1 d、3 d、7 d和14 d Mash-1 mRNA相对表达量显著升高(均P<0.01).过表达组脑创伤后1 d、3 d、7 d和14 d的Mash-1 mRNA相对表达量显著高于单纯创伤组与阴性对照组(均P<0.05).与假手术组比较,单纯创伤组脑创伤后1 d、7 d、14 d,阴性对照组和过表达组脑创伤后1 d、3 d、7 d、14 d时Mash-1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05～0.01),单纯创伤组脑创伤后3 d Mash-1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05).过表达组脑创伤后1 d、3 d、7 d、14 d的Mash-1蛋白相对表达量显著高于单纯创伤组及阴性对照组(均P<0.05).与假手术组比较,单纯创伤组脑创伤后3 d、7 d的BrdU阳性细胞数,脑创伤后3 d DCX阳性细胞数显著减少(P<0.05～0.01),过表达组显著增多(均P<0.05).过表达组脑创伤后3 d、7 d的BrdU阳性细胞数,脑创伤后3 d DCX阳性细胞数显著高于单纯创伤组(均P<0.05).单纯创伤组、阴性对照组和过表达组的脑创伤后1 d、3 d、7 d、14 d的逃避潜伏期差异无统计学意义(均P>0.05).与假手术组比较,单纯创伤组、阴性对照组和过表达组脑创伤后1 d、3 d、7 d、14 d的逃避潜伏期均显著延长(均P<0.05).结论 Mash-1基因过表达增加脑创伤后成年C57BL/6小鼠海马齿状回和大脑皮质的神经细胞增殖和分化,但对其学习和记忆功能无影响.
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脑创伤后Hes1过表达对成年小鼠海马神经再生的影响
目的 观察腺病毒载体介导的Hes1基因过表达对脑创伤后成年小鼠海马齿状回神经细胞增殖和分化的影响,探讨Hes1过表达对小鼠学习和记忆功能的作用.方法 健康成年雄性C57BL/6小鼠160只,随机分为假手术组、单纯创伤组、阴性对照组和过表达组.构建含小鼠Hes1基因的重组腺病毒,制作小鼠脑创伤液压打击模型.实时荧光定量聚合酶链反应FQ-PCR)检测TBI前1d和TBI后3d Hes1 mRNA水平上的表达;Western blot检测TBI前1d和TBI后3d Hes1蛋白在海马中组织中的表达,采用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和DCX免疫荧光分别检测脑创伤后3、7d小鼠海马齿状回神经细胞增殖和分化.脑创伤后7d和14d利用水迷宫检测Hes1过表达对小鼠学习和记忆功能的影响.结果 FQ-PCR 及Western blot检测显示TBI前1d和TBI后3d过表达组海马齿状回组织中Hes1在蛋白和mRNA水平上表达升高(1.87±0.13比0.97±0.13,P=0.025);在脑损伤后3d,过表达组小鼠海马齿状回BrdU表达量较对照组明显降低;脑损伤后7d过表达组DCX表达量较对照组显著降低.水迷宫检测发现Hes1过表达对成年小鼠逃避潜伏期以及象限百分比无明显影响(P=0.062).结论 Hes1基因过表达抑制脑创伤后成年小鼠海马齿状回神经细胞增殖和分化,但对小鼠学习和记忆功能无影响.
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促成年海马神经再生的新型抗抑郁药筛选
抑郁症是常见的心境障碍,其发病率非常高,并且近年来呈逐年上升的趋势[13].根据世界卫生组织提供的数据,目前在全世界范围内大约有3.4亿的抑郁症患者,每年有1000～2000万的患者有自杀倾向,预计到2020年,抑郁症将成为第二大致残因素[4].此外,抑郁症造成巨大的经济损失,给家庭也造成沉重的经济和精神心理负担,严重阻碍经济的发展和社会的和谐稳定.因此,抑郁症的防治研究日趋受到重视.
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异丙酚重复镇静对大鼠空间学习记忆能力及其海马齿状回新生神经元的影响
目的 观察异丙酚重复镇静对大鼠海马齿状回新生神经元形态及对大鼠空间学习记忆能力的影响.方法 48只成年SD大鼠分为异丙酚组和溶媒对照组,异丙酚组给予异丙酚重复镇静(100 mg/kg,2次/d,共7d),溶媒对照组给予同等体积的溶媒(脂肪乳剂).Morris水迷宫检测首次给予异丙酚28 d后大鼠空间学习记忆能力.首次给药后以BrdU进行标记,分别计数首次给药后1、14 d和28 d大鼠海马齿状回颗粒下区BrdU阳性细胞数.激光共聚焦显微镜观察首次给药后14 d SD大鼠海马齿状回新生神经元树突分枝数量和长度的变化.结果 在使用异丙酚镇静28 d后,与溶媒对照组相比,成年大鼠发现隐藏物体的时间显著延长[异丙酚组(14.55±1.25)s,溶媒对照组(9.36±2.54)s,P＜0.05].与溶媒对照组相比,大鼠海马齿状回颗粒下区BrdU阳性细胞数在首次给药后1d无明显变化,但在首次给药后14 d[异丙酚组(2 560.58±42.76)个,溶媒对照组(2 941.42±46.66)个,P＜0.05]和28 d[异丙酚组(1 297.75±31.99)个,溶媒对照组(2 273.75 ±40.29)个,P＜0.05]均显著减少.首次给药后14 d,异丙酚镇静组成年SD大鼠海马齿状回新生神经元树突的长度[(异丙酚组(267.25±14.20) μm,溶媒对照组(394.33±32.59) μm,P＜0.05]和分枝数[异丙酚组(2.92±0.29)个,溶媒对照组(5.67±0.49)个,P＜0.05]明显低于对照组.结论 异丙酚重复镇静可损害成年大鼠的空间学习记忆能力和新生神经元的树突复杂度.
