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KIAA1456基因过表达对骨肉瘤细胞增殖的影响
目的 探讨人tRNA甲基转移酶9样蛋白(hTRM9L)KIAA1456基因过表达对骨肉瘤细胞株增殖的影响及其分子作用机制.方法 实验分为三组:空白对照组(Ctrl组),骨肉瘤MG63和U2OS细胞不作任何处理;阴性对照组(Scrambled组),骨肉瘤MG63和U2OS细胞转染空载质粒;实验处理组(KIAA1456组),将pT3-myr-KIAA1456过表达质粒转染至骨肉瘤MG63和U2OS细胞.利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测骨肉瘤细胞中KIAA1456 mRNA和蛋白表达水平,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′ 脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测KIAA1456过表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,流式细胞术分析骨肉瘤细胞周期的变化,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白细胞质及细胞核 β 链蛋白(Cytoplasmicβ-catenin、Nucleusβ-catenin)、细胞周期蛋白-1(Cyclin D1)及C-myc的蛋白表达水平.结果 与Ctrl组和Scrambled组比较,(1)KI-AA1456组骨肉瘤MG63和U2OS细胞中KIAA1456 mRNA和蛋白表达水平增高(P均<0.01);(2)CCK-8法检测KIAA1456组在24、48、72、96 h OD值均降低(P<0.01);(3)EdU细胞增殖实验显示,KIAA1456组细胞增殖率降低(P<0.01);(4)流式细胞术显示,在MG63细胞和U2OS细胞中,KIAA1456组G0/G1期细胞数量比例增多,而S期和G2/M期细胞数量减少(P<0.05,P<0.01);(5)Western blot结果显示,KIAA1456组Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白Nucleusβ-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达降低,Cytoplasmicβ-catenin蛋白表达增高(P<0.01).结论 KIAA1456过表达可显著抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖并且使骨肉瘤细胞周期阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制 β-catenin核转位以及下调Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Cyclin D1、C-myc的表达相关.
