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乳腺癌细胞三维培养耐药模型的体外构建
本研究旨在体外构建乳腺癌三维(3D)培养模型,部分模拟肿瘤细胞在体微环境,以期建立理想的乳腺癌耐药研究模型.将乳腺癌MCF-7细胞与胶原支架材料复合,体外构建乳腺癌3D培养模型.用Carmine和HE染色法观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞增殖情况,用活-死细胞染色试剂盒观察细胞活性,检测3D培养和二维(2D)培养条件下细胞对阿霉素、卡铂、5-氟尿嘧啶的药物敏感性,实时定量RT-PCR检测耐药相关基因P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(mrp2) mRNA表达水平,用Western blot检测P-gp蛋白的表达.结果显示,3D培养组内MCF-7细胞呈聚团生长,细胞增殖及活性良好.和2D培养组相比,3D培养组细胞对化疗药物的敏感性显著降低,P-gp和mrp2 mRNA水平显著升高,P-gp蛋白水平升高至5.3倍.以上结果提示,本研究成功构建了具有耐药表型及功能的乳腺癌3D培养模型.该模型对深入阐明耐药发生相关机制等研究具有重要意义.
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工程化肝组织肝表面片状植入新方法
目的 探索较大尺度工程化肝组织原位肝表面贴覆片状植入、尽快建立血供的可行性.方法 将采用胰酶冷消化法分离的新生大鼠肝细胞(1×1010个/L)、肺组织块贴壁法分离的大鼠微血管内皮细胞(1 ×1010个/L),与片状胶原支架、血管内皮生长因子(VEGF,10g/L)复合构建肝细胞/内皮细胞/血管生长因子/胶原支架复合的片状工程化肝组织.将其在15只大鼠肝表面贴覆植入,4周后取样进行大体观察及组织切片苏木素-伊红(HE)染色.结果 分离的肝细胞及内皮细胞活率均为90％以上.片状工程化肝组织经肝表面贴覆法植入后,大体观察可见能与原位肝脏紧密贴合生长,形成体积大于1 cm3的类肝样组织.体内植入后4周,植入物与肝脏贴合紧密,融合生长.组织学观察显示移植物中肝细胞均匀分布,未见细胞变性及死亡,有血管生成.结论 肝表面贴覆植入法简便安全,可构建较大尺寸的工程化肝组织,有望达到原位修复受损肝脏的目的.
