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平面双分子层脂质膜上人工重建大电导钙激活钾通道
本研究旨在探索建立一种稳定平面双分子层脂质膜(planar lipid bilayer membranes,PLBMs)的制备方法,并尝试将大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channel,BKCa)蛋白融合其上进行单通道电流研究.将卵磷脂与胆固醇氯仿按3∶1比例混合,用N2吹干氯仿,制成癸烷脂质液,采用涂抹法制备PLBMs,并将BKCa重建到PLBMs上,用膜片钳研究其单通道特性.结果显示,重建到PLBMs上的BKCa的单通道的电导值为(206.8 ±16.9) pS,当浴液中[Ca2+]=0μmol/L时,无论超极化或去极化状态下均很少见到BKCa的通道活动.膜电位为+40 mV时,当[Ca2+]由1μmol/L增加到100 μmol/L时,通道开放概率由0.034±0.002增加到0.961±0.013,平均开放时间由(1.1±0.2) ms延长到(151.3±10.2) ms,平均关闭时间由(32.2±2.8) ms缩短为(2.1±1.8) ms;当K+浓度为40/140 mmol/L (Cis/Trans)时,重建的BKCa反转电位在-30 mV左右.以上结果提示:(1)涂抹法可用于PLBMs的制备;(2)重建后的BKCa通道具有电导值大、电压依赖性、Ca2+敏感性和K+选择性;(3) PLBMs技术可用于BKCa通道的药理学和动力学特性的研究.
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用于离子通道实验的人工脂质膜的制备
目的:摸索并建立制备平面双分子层脂质膜的方法.方法:将卵磷脂或不同比例的卵磷脂与胆固醇混合液作为成膜液,采用涂抹法制备平面双分子层脂质膜；实验中控制脂质的成分及周围的电解质环境,摸索佳成膜条件；将含有两性霉素B的脂质体或α-toxin加入膜的一侧实验槽内,使其与双分子层脂质膜相融合并形成孔道,观察孔道形成中成膜质量.结果:终确定的方法制备的平面双分子层脂质膜稳定性强,并能与含有两性霉素B的脂质体迅速融合,孔道形成过程中性质稳定.结论:涂抹法是一种比较稳定的脂质膜制备的简便有效方法,可为离子通道蛋白动力学及药理学特性的研究提供研究载体.
