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温经汤对子宫内膜异位症大鼠在位和异位内膜VEGF及SPARC表达的影响
目的:探讨温经汤对子宫内膜异位症大鼠在位和异位内膜中血管内皮生长因子(VEGF)及富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)表达的影响.方法:自体移植法建立子宫内膜异位症(EMs)大鼠模型.将造模成功的大鼠随机分为模型组、米非司酮组及温经汤低、中、高剂量组,另取一组正常大鼠为正常对照组.各组分别给予生理盐水、米非司酮和温经汤灌胃,连续给药21 d后处死大鼠,取子宫和异位内膜组织.免疫组化法观察在位和异位内膜中VEGF和SPARC的定位和表达情况,Western blotting法检测二者在在位和异位内膜中的蛋白表达量.结果:免疫组化结果显示,模型组在位和异位内膜中VEGF和SPARC阳性表达强烈,各治疗组在位和异位内膜中二者的阳性表达均有不同程度的降低.Western blotting检测显示,温经汤中、高剂量组在位和异位内膜VEGF蛋白含量较模型组显著降低(P＜0.05);除温经汤低剂量组 外,其余各组在位内膜SPARC蛋白含量均低于模型组(P＜0.05);温经汤中、高剂量组异位内膜SPARC蛋白含量和模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:温经汤可以降低EMs大鼠在位和异位内膜中VEGF和SPARC表达,影响新生血管形成,抑制异位子宫内膜的生长.
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沉默SPARC基因抑制高氟介导的甲状腺细胞凋亡
目的 研究富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)对高氟介导的甲状腺细胞凋亡的作用及可能机制.方法 培养人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1,给予不同浓度的NaF(0.1、1、10 mmol/L)处理24 h,通过实时定量PCR和蛋白印迹法评价SPARC的表达,确定后续实验NaF作用浓度.另将细胞分组进行实验:对照组、NaF组(1 mmol/L孵育24 h)、si-SPARC组(转染SPARC siRNA 48 h用NaF处理)和si-NC组(转染Negative control siRNA 48 h用NaF处理).CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞毒性;细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测活化caspase3(c-caspase3)和IGF-1R的蛋白表达.此外,将siSPARC和siIGF-1R共同转染至甲状腺细胞,通过评价细胞凋亡进一步探讨SPARC的作用机制.结果 随着NaF的浓度增大,SPARC mRNA和蛋白表达均逐渐升高(P<0.05).si-SPARC组细胞活性较si-NC组增高[(84.02±9.51)％vs.(58.31±6.86)％,P<0.05],且LDH释放率减少[(134.25±18.98)％vs.(195.18±23.50)％,P<0.05].si-SPARC组较si-NC组细胞凋亡率减少[(124.67±19.44)％vs.(175.24±16.46)％,P<0.05].此外,si-SPARC组(1.95±0.24 vs.0.93±0.08,P<0.05)IGF-1R蛋白表达上调,抑制IGF-1 R逆转SPARC对细胞凋亡的作用.结论 沉默SPARC基因降低高氟介导的细胞毒性、抑制细胞凋亡,其机制可能是通过负调控IGF-1 R实现的.
