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新疆家蚕抗菌肽与化疗药物联用对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究新疆家蚕抗菌肽(cecropin-XJ,CE-XJ)与4种化疗药物联用对人食管癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响.方法:MTT法检测CE-XJ联合不同浓度的多柔比星(doxorubicin,ADM)、卡铂(carboplatin,CBP)、顺铂(cisplatin,DDP)和环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对人食管癌Eca109细胞增殖的影响,流式细胞术分析CE-XJ与ADM、CBP、DDP、CTX联用对Eca109细胞凋亡、活性氧及线粒体膜电位的影响.结果:单独使用CE-XJ(1～50 μmol/L)可依剂量依赖方式显著抑制Eca109细胞的增殖(P＜0.05或P＜0.01).CE-XJ分别与ADM、DDP、CTX联合用药,与单独用药相比,Eca109细胞的增殖抑制明显加强、细胞凋亡率显著增加(均P＜0.05或P＜0.01),细胞内活性氧水平显著增加(P＜0.05),而线粒体膜电位显著降低(均P＜0.05).但CE-XJ与CBP联用时出现拮抗现象,与单独用药相比,细胞增殖抑制变化不大,细胞凋亡率反而降低.结论:CE-XJ与化疗药物ADM、DDP和CTX联用对人食管癌Eca109细胞的增殖抑制和凋亡诱导有明显促进作用,其机制可能与细胞内活性氧和线粒体膜电位变化有关.但CE-XJ与CBP联用则起拮抗作用,其机制有待进一步探讨.
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新疆家蚕抗菌肽的抗体制备及鉴定
目的:制备鼠抗新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)的抗体, 用于抗菌肽的体外细胞定位分析.方法:将编码抗菌肽的cDNA序列亚克隆到真核表达载体pcDNA3上, 构建重组真核表达载体pcDNA3/Cecropin-XJ, 进行核酸免疫昆明白小鼠;同时构建原核表达载体, 对抗菌肽进行融合表达, 以表达的融合蛋白作为检测抗原.采用免疫电镜技术分析Cecropin-XJ的作用部位.结果:间接ELISA表明, 重组质粒第5次免疫的效价高;免疫胶体金实验显示, 所制备的抗血清能够对抗菌肽作用部位进行准确清晰的定位.结论:所制备的鼠抗Cecropin-XJ的抗血清具有较高的免疫反应性和特异性, 为Cecropin-XJ的抑菌机制研究提供了有力的工具, 同时也为小分子肽抗体的制备提供了参考.
