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MicroRNA-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤的抑制及其可能的机制
目的:探讨microRNA-129-2 (miR-129-2)对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制.方法:建立人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,按皮下注射的药剂将32只模型小鼠用随机数字表法分为4组:对照组(皮下注射生理盐水0.2 ml/d)、空白质粒组[(50 μg/只,0.2 ml/次,1次/d]、顺铂(cisplatin,DDP)阳性对照组(1 mg/kg,0.2ml/次,1次/d)、miR-129-2组[(50 μg/只,0.2 ml/次,1次/d],共治疗5周,记录裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量.流式细胞术检测各组移植瘤组织S+ G2-M期细胞比例,免疫组化和Western blotting方法检测miR-129-2对移植瘤组织中转录因子SOX4表达的影响.结果:成功建立CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,治疗第22天起,miR-129-2组移植瘤的体积和质量均显著低于对照组和空白质粒组(P＜0.01),而与DDP组始终无明显差异(P＞0.05);5周后,miR-129-2组荷瘤小鼠的体质量显著高于其他3组(均P＜0.01).miR-129-2组移植瘤组织S+G2-M期细胞比例显著低于与对照组和空白质粒组(P＜0.01),与DDP组无显著差异(P＞0.05).移植瘤组织SOX4表达显著高于瘤旁组织,miR-129-2组和DDP组移植瘤组织内SOX4蛋白表达均较对照组显著降低(均P＜0.01),且miR-129-2组SOX4蛋白表达显著低于DDP组(P＜0.05).结论:miR-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下裸移植瘤的生长有明显的抑制作用,其机制可能与SOX4表达下调有关.
关键词： 微小RNA-129-2 SOX4 鼻咽癌 移植瘤 -
胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序岛区甲基化对微小RNA-129-2表达调控及肾癌细胞增殖和克隆形成的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-129-2上游胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛区甲基化对其在肾癌中的表达调控,并探讨对肾癌细胞增殖和克隆形成能力的影响.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸盐处理测序法(BSP)检测miR-129-2上游CpG岛区的甲基化状态,探针法实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(Taqman-RT-PCR)检测miR-129-2的表达,噻唑蓝(MTT)法、平板克隆形成实验分别检测去甲基化对肾癌细胞增殖和克隆形成能力的影响.结果 MSP显示在肾癌组织中miR-129-2是高甲基化状态,同时BSP结果显示经去甲基化试剂处理后的肾癌细胞株(786-O、ACHN、Caki-1和796-P)中miR-129-2的甲基化程度降低[(66.16±6.20)％比(85.63±6.27)％、(66.20±6.55)％比(86.74±4.42)％、(59.00±4.58)％比(76.85±9.40)％、(63.13±6.07)％比(80.32±8.39)％;t=3.824,4.498、2.956、2.874;P=0.019、0.011、0.042、0.045];表达水平显著升高,与对照组比较分别为(0.107 ±0.001比0.059±0.005、0.084±0.007比0.027±0.005、0.173±0.006比0.151±0.050、0.114±0.006比0.079±0.004);t =9.793、11.897、3.093、7.566;P =0.001、0.000、0.036、0.002);与各对照组比较,786-0、ACHN和769-P细胞株在去甲基化试剂处理后对细胞增殖能力(0.97±0.16比1.42±0.13、1.34±0.09比1.76±0.06、0.92±0.04比1.16±0.07;t=3.804、6.329、5.220;P=0.019、0.003、0.006)和克隆形成能力[(69±3)个比(102±6)个、(57±5)个比(78±6)个、(91±5)个比(112±6)个;f=8.498、4.571、5.157;P=0.001、0.010、0.007]两个方面均减弱.结论 miR-129-2的表达受DNA甲基化调控,且与肾癌细胞的增殖和克隆形成能力密切相关.
关键词： 微小RNA-129-2 甲基化 肾癌细胞 增殖 克隆形成
