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microRNA-155(miR-155)文献资料
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miR-155对人肺癌95D细胞生物学行为的影响
目的:构建携microRNA-155(miR-155)的真核表达载体并观察其转染高转移性人巨细胞肺癌95D细胞后细胞的生物学行为变化.方法:以95D细胞基因组RNA为模板,经PCR法扩增miR-155的前体序列,由BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后将其亚克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(-),并进行双酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-pri-miR-155载体(命名为p-miR-155)体外瞬时转染人肺癌95D细胞,利用Real-time PCR探针法检测miR-155成熟体的表达水平,并利用CCK-8法、克隆形成实验和划痕法检测95D细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力.结果:成功构建携miR-155的真核表达载体;与空白(Mock)和对照组(p-Ctrl)相比,转染后的95D细胞过表达miR-155[(2.04±0.62)vs(0.76±0.62)、(1.00±0.45),均P＜0.01]、p-miR-155载体转染组95D细胞的增殖抑制明显增加[(46.70±6.89)％vs(3.70±1.40)％、(1.11±0.75)％,P＜0.01]、克隆形成能力(在100和1 000个细胞/孔接种条件下)明显下降[(12±3) vs (34±3)、(35±3)个,P＜0.01;(78 ±4)vs(159±4)、(165 ±4)个,P＜0.01)],此外,细胞的迁移细胞数也明显减少[(110±5) vs (295 ±5)、(325±5)个,P＜0.0l].结论:通过miR-155真核表达载体转染产生的过表达miR-155可显著抑制人肺癌95D细胞的增殖和迁移能力.
