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胰岛素瘤相关蛋白-2文献资料
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胰岛素瘤相关蛋白-2自身抗体酶联免疫吸附测定方法的建立
目的:建立糖尿病患者血清中胰岛素瘤相关蛋白-2(IA-2)自身抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法.方法:以链亲和素预包被的聚苯乙烯微量滴定板为固相载体,原核表达的生物素酰化IA-2胞内段融合蛋白为抗原,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG为二抗,2,2'-连氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸](ABTS)为显色底物建立ELISA.结果:本方法的平均批内变异系数为8.8%,批间变异系数为7.7%.用该方法和Roche公司生产的"Diaplets Anti-IA-2"IA-2自身抗体酶联免疫试剂盒进行对比,共检测218例糖尿病患者,以Roche试剂盒的检测结果为准,本方法的诊断灵敏度为92.1%,特异度为98.9%.结论:本研究建立的IA-2自身抗体ELISA法有较好的灵敏度、特异度和精密度,且操作简单方便,有较广阔的应用前景.
关键词： 胰岛素瘤相关蛋白-2 自身抗体 糖尿病 酶联免疫吸附测定 -
人胰岛素瘤相关蛋白-2基因的克隆及原核表达研究
目的克隆1型糖尿病自身抗原人胰岛素瘤相关蛋白-2(IA-2)的编码基因,并从大肠杆菌中表达具有免疫原性的人IA-2重组蛋白.方法抽提胎脑总RNA,通过RT-PCR获得编码IA-2胞内结构域的cDNA,与Pinpoint Xa-1T质粒相连接,构建表达型重组质粒,经转化、筛选并鉴定后,从大肠杆菌诱导表达生物素酰化融合蛋白,进而用亲和层析纯化之,以dot-blot鉴定其免疫原性.结果重组质粒转化的大肠杆菌经IPTG诱导表达及亲和层析后得到了纯度较高、分子量约为59kd的融合蛋白,表达产物用dot-blot证明具有免疫原性.结论原核表达的生物素酰化人IA-2胞内段融合蛋白具有正确的免疫学构象.
关键词： 1型糖尿病 胰岛素瘤相关蛋白-2 自身抗原 自身抗体
