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肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响
构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响.以RT-PCR、Western blot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱.利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER).利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞.采用Real-time PCR检测目的基因的表达;FACS、Western blot方法分析目的蛋白的表达.MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响.双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实.经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果.并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡.OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础.
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肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体的制备和鉴定
和临床应用奠定了基础.
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肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达
目的 分析肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达特征,探讨其临床应用价值.方法 采用免疫组织化学法检测多种组织肿瘤芯片和肿瘤组织标本(包括胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌和卵巢癌)及其相应的非肿瘤组织中OVA66蛋白的表达,分析其表达与组织的良恶性以及肿瘤转移和临床病理特征的关系.结果 OVA66蛋白在胃、肠、卵巢、膀胱和肾的肿瘤组织中的表达显著高于正常组织,在肺和乳腺肿瘤组织中表达较弱.膀胱癌OVA66的表达与膀胱癌的病理分级呈现相关性,肠癌和膀胱癌的淋巴转移组表达阳性率略高于未转移组,但差异无统计学意义.结论 OVA66蛋白在多数肿瘤组织中均呈高表达,在膀胱癌中与肿瘤病理分级相关,提示OVA66有可能成为新的肿瘤标志物应用于多种肿瘤的辅助诊断.
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探讨高表达肿瘤抗原基因OVA66对WISH细胞生物学特征的影响
目的 分析转染OVA66基因WISH细胞的生物学特征变化,探讨该基因的功能.方法 采用脂质体方法将重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染正常人羊膜细胞系WISH,经G418稳定筛选、克隆和扩增.采用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光等方法检测目的基因及其蛋白的表达,通过电镜分析细胞超微结构,体外侵袭实验检测细胞生长特性和侵袭能力, 软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力,并应用基因芯片技术检测相关基因差异表达.结果 RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1-OVA66细胞OVA66基因呈高表达;Western bloting显示OVA66蛋白处出现明显的条带;电镜检测表明该基因可明显增强WISH细胞增殖能力;体外侵袭实验显示,该基因可增强WISH细胞的侵袭转移能力;软琼脂克隆形成实验表明OVA66基因可以促进单克隆性生长能力;基因芯片提示,该基因高表达影响某些基因的异常表达.结论 提示OVA66基因高表达可促进细胞的增殖,利于肿瘤的侵袭和转移.
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肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响
目的: 探讨肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响.方法: 采用脂质体法, 以重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染肝癌细胞系SMMC-7721, 经G418稳定筛选、克隆及扩增, 采用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学(ICC)染色法, 检测目的基因及其蛋白的表达.用FACS检测细胞周期的变化;电镜技术观察细胞的超微结构;体外运动、侵袭实验检测细胞运动及侵袭能力;并应用基因芯片技术检测相关基因的差异表达.结果: RT-PCR检测显示, 转染pcDNA3.1-OVA66的细胞中OVA66基因呈高表达.Western blot显示, 在OVA66蛋白处出现明显的条带.电镜和FACS检测表明, 该基因可增强肿瘤细胞的增殖能力.体外运动、侵袭实验证实, 该基因可促进肿瘤细胞的迁移、侵袭.基因芯片显示, 该基因的高表达可促进Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)等基因的表达, 影响肿瘤的侵袭和转移.结论: OVA66基因及其蛋白可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等一系列生物学功能.
