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新型过氧化物酶peroxiredoxin-1对大鼠肺成纤维细胞JNK介导的Ⅰ和Ⅲ型前胶原合成的影响
目的:探讨活性氧(ROS)在转化生长因子(TGF-β1)激活c-Jun N末端激酶(JNK)促进肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型前胶原过程中的作用,并观察新型过氧化物酶peroxiredoxin-1 (Prx-1)是否通过抑制活性氧来抑制TGF-β1促纤维化作用.方法:采用脂质体转染法转染真核质粒;免疫荧光检测质粒转染和8-OHdG(DNA氧化产物)的水平;免疫印迹检测Ⅰ/Ⅲ型前胶原、磷酸化JNK和Prx-1的表达.结果:与对照组比较,TGF-β1组的Ⅰ/Ⅲ型前胶原、8-OHdG及磷酸化p-JNK的表达水平均明显增加.与TGF-p1组比较,空载体组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1转染组的指标均明显下降.结论:TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成活性氧,并由此促进JNK的激活和Ⅰ/Ⅲ型前胶原合成增加,而Prx-1则通过抑制活性氧来抑制TGF-β1的促纤维化作用.
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新型过氧化物酶 Peroxiredoxin -1对大鼠肺成纤维细胞增殖和JNK通路的影响
目的：探讨新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1（Prx-1）对大鼠肺成纤维细胞（FB）增殖和JNK通路的影响。方法体外培养FB，随机分为：对照组、TGF-β1组、空转染组、Prx-1转染组。对照组：以0.4％血清浓度MEM作为基础培养液；TGF-β1组：0.4％血清培养条件下，给予TGF-β1（5μg/L）孵育细胞；空转染组：利用脂质体Lipo2000将空载体转染到FB 36 h，给予同步化处理12 h后，在0.4％血清培养条件下，给予TGF-β1（5μg/L）孵育细胞；Prx-1转染组：Prx-1真核表达质粒转染到FB 36 h，给予同步化处理12 h后，在0.4％血清培养条件下，给予TGF-β1（5μg/L）孵育细胞。质粒转染采用脂质体转染法；免疫荧光检测质粒转染和8-OhdG（DNA氧化产物）的水平；MTT法检测FB增殖；Western blot 检测JNK和Prx-1的表达情况。结果质粒成功转染入FB，转染Prx-1真核表达质粒使Prx-1在FB内蛋白表达水平增高。与对照组比较，TGF-β1组的FB增殖、8-OhdG及磷酸化的JNK表达均明显增加。与TGF-β1组比较，空转染组中的上述观察指标无明显变化，但在Prx-1转染组，这些指标均明显下降。结论 TGF-β1能够诱导FB生成反应性氧物质（ROS），并由此促进JNK的激活和FB增殖，而Prx-1可通过抑制ROS来抑制TGF-β1诱导的FB增殖。
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Peroxiredoxin-1基因沉默对转化生长因子β1促进肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响
目的 探讨Peroxiredoxin-1 (Prx-1)基因沉默对转化生长因子β1(TGF-β1)促进肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原的影响及其作用机制.方法 体外培养肺成纤维细胞分为4组:对照组(0.4％血清),TGF-β1组(5 μg/L),TGF-β1+阴性转染组(5μg/L TGF-β1+阴性对照siRNA),TGF-β1+ Prx-1 siRNA转染组(5 μg/L TGF-β1 +Prx-1 siRNA).利用脂质体Lipo2000将阴性对照siRNA和Prx-1 siRNA分别转染到TGF-β1+阴性转染组和TGF-β1+Prx-1 siRNA转染组的肺成纤维细胞中,转染48 h后用于后续实验.实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后各组的Prx-1 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Akt(p-Akt)及Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白水平,2,7-二氯荧光素二乙酸检测活性氧(ROS)水平.结果 (1) Prx-1 siRNA转染肺成纤维细胞后,TGF-β1+ Prx-1 siRNA转染组的Prx-1 mRNA表达明显降低.(2)与对照组比较,TGF-β1组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及pAkt蛋白水平均明显增加(0.34±0.06 vs.0.58±0.06、0.42±0.05 vs.0.56±0.06、2 988±379 vs.4 315±580和0.29±0.05 vs.0.66±0.07,差异有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+阴性转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt水平无明显变化(P＞0.05),但TGF-β1+ Prx-1 siRNA转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt蛋白水平均进一步增高(0.58±0.06 vs.0.79±0.09、0.56±0.06 vs.0.77±0.08、4 315±580 vs.5 841±782和0.66±0.07 vs.0.93±0.15,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进Akt的激活和肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原;而沉默Prx-1基因可激活ROS/Akt通路,从而有助于TGF-β1促进肺成纤维细胞合成胶原.
关键词： 活性氧 转化生长因子-β1 胶原 peroxiredoxin-1
