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p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用
目的 探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠(NaAs02)致人胚胎肺成纤维细胞(HELF)凋亡中的作用.方法 分别取转染了p53质粒HELF细胞(p53组)、转染了PC质粒的HELF细胞(PC组)、常规培养的HELF细胞(正常组),在6孔板中培养48 h后,分别加入0、3、9、15 mmoL/L NaAsO2溶液,培养24 h后,用real-time PCR法检测p53、Bax、bcl-2 mRNA基因表达水平,采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋白表达水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 p53组细胞p53基因mRNA表达水平(0.51±0.29)低于PC组及正常组[(1.32±0.26),(1.00±0.20),P均<0.05],p53组p53基因蛋白表达水平[(4.10±1.20)%]低于PC组和正常组[(8.00±1.63)%、(7.90±1.79)%,P均<0.05];p53组、PC组、正常组在染砷0、3、9、15 mmol/L时,细胞凋亡率[(0.57±0.28)%、(22.91±4.86)%、(40.05±3.93)%、(44.87±3.58)%,(0.65±0.24)%、(14.09±3.49)%、(20.31±3.66)%、(32.42±3.63)%,(0.56±0.25)%、(12.14±3.70)%、(19.61±3.63)%、(30.43±2.83)%]、Bax mRNA表达水平[(12.73±3.96)、(25.12±6.42)、(104.96±26.77)、(154.04±3052),(14.63±3.57)、(36.75±3.67)、(272.26±66.11)、(846.12±243.36),(14.75±5.65)、(37.22±11.27)、(278.51±37.42)、(861.67±369.29)]、Bax蛋白表达水平[(15.07±0.83)%、(23.79±3.99)%、(3851±158)%、(53.86±124)%,(15.43±1.45)%、(36.11±1.37)%、(56.86±1.97)%、(76.09±2.01)%,(15.20±1.03)%、(35.25±1.09)%、(55.56±2.17)%、(74.48±2.85)%]均随着染毒剂量的增加而增高(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达水平[(443.00±244.47)、(156.79±53.18)、(62.13±13.66)、(23.10±6.44),(420.55±110.77)、(48.15±10.02)、(14.91±6.53)、(7.54±2.62),(577.75±123.22)、(49.68±10.11)、(12.41±1.28)、(7.22±1.89)]、bcl-2蛋白表达水平[(47.20±3.77)%、(41.80±2.94)%、(36.00±2.36)%、(29.00±2.91)%,(45.90±4.15)%、(35.70±2.77)%、(29.80±2.78)%、(24.80±2.66)%,(46.70±3.47)%、(36.20±2.90)%、(30.10±3.21)%、(25.10±2.28)%]均随着染毒剂量的增加而降低(P均<0.05);在染砷3、9、15 mmol/L时,p53组的细胞凋亡率、bcl-2 mRNA表达水平、bcl-2蛋白表达水平均高于同一染砷剂量的正常组和PC组(P均<0.05),而Bax mRNA表达水平、Bax基因蛋白表达水平均低于同一染砷剂量的正常组和PC组(P均<0.05).结论 p53基因减少了NaAsO2致HELF的凋亡,可能是通过改变部分凋亡途径实现.
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PDGF、FN诱导FHL1细胞增殖的P13K信号转导通路研究
目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(P13K)信号转导通路.方法 采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察P13K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用的影响.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.结果 PDGF和FN对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性升高趋势,二者均在50 ng/mL时作用显著;P13K抑制剂wortmannin可抑制PDGF和FN诱导的HFL1细胞增殖.结论 PDGF和FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过P13K信号转导途径实现.
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p53基因降低肺成纤维细胞对亚砷酸钠敏感性
[目的]探讨p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞毒性中的作用.[方法]利用RNA 干扰技术建立p53基因低表达细胞,用RT-PCR法及免疫组织化学SABC法分别从mRNA水平和蛋白水平验证其p53基因表达降低;MTT法测亚砷酸钠染毒24 h的不同组细胞(p53低表达组、PC质粒对照组、正常细胞组)的IC50.[结果]①p53低表达组的p53基因mRNA和蛋白表达水平均较PC质粒对照组及正常细胞组明显降低(P﹤0.05),表达量约是正常细胞的50%;PC质粒对照组与正常细胞组p53基因mRNA表达间无差异(P﹥0.05).② p53低表达组、PC质粒对照组、正常细胞组细胞的IC50分别为:28.80 ± 0.68、43.10 ± 1.33、43.43 ± 1.49(mM),p53低表达组与其他两组均有差异(P﹤0.05),PC质粒对照组与正常组间无差异(P﹥0.05).[结论]p53基因是降低人胚肺成纤维细胞对亚砷酸钠毒性的敏感性的因子,其机制可能是通过调整细胞周期、减少细胞凋亡实现的.
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RNAi构建p53基因低表达细胞
目的 构建p53基因低表达的人胚胎肺成纤维细胞(HELF).方法 利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术建立p53基因低表达的HELF.采用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法,分别从mRNA和蛋白水平检测不同组(p53基因低表达细胞组、对照细胞组、正常细胞组)HELP的p53基因表达改变.结果 转染p53质粒组(低表达组)细胞,p53基因mRNA和蛋白表达水平均较正常细胞组及转染PC质粒组细胞明显降低,差别有意义(P<0.05),表达量约是正常细胞的50%;转染PC质粒组(对照组)细胞与正常组细胞p53基因mRNA表达间差异无意义(P>0.05).结论 p53基因低表达HELF构建成功.
关键词： RNAi p53基因 人胚胎肺成纤维细胞 Real-time PCR
