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酵母源金属硫蛋白对急性汞中毒小鼠的排汞作用及对机体氧化损伤的修复
目的 探讨酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)对急性汞中毒小鼠的排汞及对机体氧化损伤的修复作用.方法 经颈部皮下注射氯化汞生理盐水溶液建立急性汞中毒小鼠模型.酵母源MT-1及MT-2的低、中、高剂量组(0.16、0.40、0.80 mg/kg bw)均于每日同一时间灌胃给药,连续给药14 d,同时设模型组(等体积生理盐水)、阳性对照组(DMPS,0.80 mg/ kg bw)及正常组小鼠(等体积生理盐水).末次灌胃给药后小鼠禁食12 h,测量小鼠体重,检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,机体总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量;同时测定血液、肝脏和肾脏中汞离子的含量.结果 与正常组小鼠比较,模型组小鼠体重显著下降(P＜0.05);血清SOD、GSH-Px活力及T-AOC显著降低(P＜0.05),MDA含量及血液、肝脏、肾脏中汞离子含量显著上升(P＜0.05).与模型组小鼠比较,除两种低剂量MT组外,其他剂量MT组小鼠体重均显著上升(P＜0.05);各MT组小鼠血清SOD、GSH-Px活力及T-AOC均明显升高(P＜0.05),MDA含量及血液、肝脏、肾脏中汞离子含量均明显降低(P＜0.05),且高剂量MT效果佳.结论 两种酵母源MT对急性汞中毒小鼠具有良好的排汞作用,并可修复机体的氧化损伤,且作用效果与给药剂量呈正相关.
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酵母源金属硫蛋白体外抗氧化能力测定
目的 测定酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)-1、MT-2体外抗氧化能力.方法 以动物源金属硫蛋白(Zn-MT)为对照,测定酵母源MT对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+·)、羟基自由基(OH·)、超氧阴离子自由基(·O2-)的清除能力、总还原能力及抑制脂质体过氧化能力大小.结果 3种MT均对自由基有良好的清除能力,在20 ～ 100 μg/ml范围内,酵母源MT-1、MT-2及Zn-MT随质量浓度的增加,对4种自由基的清除能力均不断增强,且增加趋势几乎一致;3种MT随质量浓度增加,对自由基清除能力的增率趋于平缓.3种MT对ABTS+·、OH·、· O2-的清除能力差异有统计学意义(P＜0.01),清除能力大小为Zn-MT＞ MT-1＞MT-2;对DPPH自由基清除能力大小为Zn-MT＞ MT-1＞MT-2,MT-2与Zn-MT及MT-1之间差异有统计学意义(P＜0.01).3种MT总还原能力随质量浓度的增加均不断增强,其中酵母源MT-1与酵母源MT-2及Zn-MT之间的IC50值差异有统计学意义(P＜0.01),总还原能力大小为Zn-MT＞ MT-1＞MT-2.3种MT均可有效抑制脂质体过氧化的产生,并随质量浓度的增加对脂质体过氧化的抑制率平缓上升,除酵母源MT-1外,在60～100 μg/ml浓度范围内,MT对脂质体过氧化抑制能力的增率小于20～60 μg/ml范围,且Zn-MT抑制脂质过氧化的效果优于酵母源MT,其IC50大小为Zn-MT＞ MT-1＞MT-2,其中酵母源MT-1与酵母源MT-2及Zn-MT之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 两种酵母源MT对体外自由基均有良好的清除效果及抑制脂质体过氧化的效果,显示出良好的体外抗氧化特性,且其体外抗氧化能力酵母源MT-1＞MT-2.
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酵母源金属硫蛋白对急性铅中毒小鼠的排铅及过氧化损伤修复作用
目的 探讨具有自主知识产权的两种构型酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)对急性铅中毒小鼠的排铅及过氧化损伤修复作用.方法 一次性经腹腔注射醋酸铅溶液(100 mg/kg),构建急性铅中毒小鼠模型,另设正常对照组(NOR组,注射生理盐水0.2 mg/kg).将模型小鼠随机分为11组:模型对照组(MoD组,注射生理盐水0.2 mg/kg)、阳性对照组[二巯基丁二酸(dimercaptosuccinic acid, DMSA)组,注射DMSA 0.16 mg/kg]、动物源MT(Zn-MT)低(0.16 mg/kg)、中(0.2 mg/kg)、高(0.24 mg/kg)剂量组、MT-Ⅰ低、中、高剂量组、MT-Ⅱ低、中、高剂量组,每组10只.造模2h后,小鼠每天同一时间一次性灌胃给药0.2ml,连续14 d.实验期间,每天观察并记录小鼠形态特征及体重变化.末次给药24 h后,每组随机选取5只小鼠,测定血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)水平(抗氧化酶活性);各组其余5只采用石墨炉原子吸收光谱法测定血液中矿物元素铅的含量.结果 小鼠急性铅染毒后,体重升高程度显著下降(P＜0.05),灌胃给药14 d后,仅DMSA组小鼠中毒症状改善,体重与NOR组小鼠差异无统计学意义(P＞0.05);MT处理组小鼠体重与MoD组差异无统计学意义(P＞0.05).与MT处理组比较,DMSA组小鼠血铅含量显著下降(JP＜0.05),MDA含量显著升高(P＜0.05).与MoD组比较,MT处理组小鼠血铅水平显著下降(P＜0.05),且呈显著的量效关系(P＜0.05),MT-Ⅰ与Zn-MT排铅效果差异无统计学意义(P＞0.05),但显著高于MT-Ⅱ(P＜0.05).3种MT处理组小鼠血清中MDA、SOD及GSH-Px水平驱于正常(P＜0.05),其中MT-Ⅰ与MT-Ⅱ组小鼠血清中MDA水平显著低于Zn-MT组(P＜0.05),SOD与GSH-Px水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种构型的酵母源MT对急性铅中毒小鼠具有显著的排铅效果,与动物源MT效果类似,并能显著提高抗氧化酶活性,减少脂质过氧化产物,从而修复铅致机体过氧化损伤.
