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pSilencer3.1-H1文献资料
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抗大肠癌siRNA载体上报告基因的构建与鉴定
目的:在siRNA载体上构建带绿色荧光蛋白(GFP)的报告基因,此重组质粒用于抗大肠癌的进一步研究.方法:用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白基因与真核细胞表达载体pSilencer3.1-H1的重组体(pSilencer3.1-H1/GFP),并用脂质体介导的转染技术,将其导人人大肠癌细胞.结果:GFP基因的PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,可见目的片段大小与预期一致.重组pGEM-GFP克隆插入序列经测序鉴定结果与GenBank报道一致.重组质粒pSilencer3.1-H1/GFP用NruⅠ和PstⅠ双酶切后可见2条电泳带,3 500 bp为pSilencer3.1-H1质粒片段,700 bp左右为GFP片段,以PCR分析此插入序列也获得约700 bp的泳带,与预期一致.此重组质粒转染大肠癌细胞后,在倒置荧光显微镜下可见视野内发绿色荧光的细胞.结论:成功构建了含报告基因的重组质粒pSilencer3.1-H1/GFP,此重组质粒可进一步用于抗大肠癌的研究,方便转染效率的直观观察,有利于流式细胞仪的检测.
