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颗粒型环瓜氨酸肽抗原的制备及条件优化
目的 探讨颗粒型环瓜氨酸肽抗原的制备方法,并对实验条件进行优化.方法 通过碳二亚胺交联法将人工合成的CCP与BSA共价偶联,使偶联产物蛋白大小在70-170 KD之间,经紫外吸收光谱鉴定偶联成功.采用碳二亚胺两步法将偶联成功的CCP与BSA复合物又与聚苯乙烯微球偶联,优化偶联条件,根据蛋白偶联量和偶联效率判断偶联效果.结果 (1)BSA与CCP偶联质量比为1∶1,EDC与NHS用量比为2∶3,偶联pH为6.0,BSA与CCP偶联可以达到较好的效果.BSA与CCP偶联产物在70 KD-170 KD之间,紫外吸收峰有明显左移.(2)微球与偶联蛋白的吸附效率随着EDC用量的增大而增大,当EDC用量达到7.5 mg/ml时,偶联蛋白大效率达到63.66%.(3)随着偶联时间的延长,蛋白偶联微球的效率不断增加,在偶联时间为0.5-2 h内,偶联效率增加快,当反应时间2 h后,反应趋于平衡.(4)对不同偶联反应pH值条件进行筛选,pH为7.5时偶联效果好,pH7.0-8.0为适宜偶联的pH范围.结论 CCP-BSA偶联产物蛋白与胶乳颗粒偶联,当EDC浓度为7.5 mg/ml,偶联时间为2 h,反应PH值为7.5,蛋白偶联效率可达到63.66%.
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人复制蛋白变体胶乳增强免疫检测试剂盒的研制
初步建立了人复制蛋白变体(CIZ1-V)的胶乳增强免疫比浊检测方法,用于早期肺癌的检测.用制备的CIZ1-V多克隆抗体(兔抗)与0.13 μm粒径的胶乳微球颗粒进行化学偶联,研制CIZ1-V试剂盒,并对试剂盒性能进行鉴定.结果表明,CIZ1-V试剂盒标准曲线呈线型,相关系数R2 =0.998 8;检测范围为0.20～8.00μg/mL,灵敏度为0.11 μg/mL,检测限为0.20μg/mL.试剂盒对表达纯化所得目的蛋白的回收率范围为98.92％～104.00％,平均100.91％;平均批内及批间变异系数均小于5％,符合国家检测试剂盒标准.试剂盒和Elisa方法对于表达纯化所得目的蛋白的回收率元显著差异(P＞0.05),对1L菌液的CIZ1-V表达量测定结果也无显著差异(P＞0.05),为早期肺癌的血清检测做了充分准备.
