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神经鞘氨醇磷酸胆碱对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成影响
目的观察神经鞘氨醇磷酸胆碱(Sphingosylphosphorylcholine,SPC)对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成的影响.方法利用儿童包皮组织行人真皮成纤维细胞原代培养,采用不同浓度SPC处理培养的细胞,测定3H-TdR掺入量.结果SPC浓度为2μM时,3H-TdR掺入量明显高于对照组(P＜0.05),5μM时3H-TdR掺入量达高峰,而后逐渐降低,20μM时3H-TdR掺入量为低.结论在一定浓度范围内SPC能明显促进原代培养人真皮成纤维细胞DNA的合成,在人类皮肤创伤愈合的治疗领域中,是一个很有应用前景的物质.
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神经鞘氨醇磷酸胆碱对人成纤维细胞差异表达基因的筛选
目的利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库,从中克隆出差异表达基因.方法原代培养人皮肤成纤维细胞;提取经SPC处理和未处理的成纤维细胞总RNA,合成cDNA,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库,用RNA印迹验证阳性克隆,测序并登陆基因库寻找同源性基因.结果成功构建了SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA文库;从实验组筛查的28个差异表达克隆中确定了6个差异表达基因,其中已知基因5个、新基因1个,分别为基质金属蛋白酶2,血小板反应蛋白1,催产素受体,锌指转录因子,铁传递蛋白受体等.结论神经鞘氨醇磷酸胆碱可上调人真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶、血小板反应蛋白1、催产素受体、锌指转录因子、铁传递蛋白受体等基因表达.
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神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞基因表达的影响
目的 利用基因芯片技术分析神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞基因表达谱的影响,从基因水平探讨其促进皮肤创伤愈合的机制.方法 从经SPC处理和未处理的原代培养人皮肤成纤维细胞中抽提总RNA,制备cDNA芯片探针,与基因芯片进行杂交,扫描仪扫描芯片,扫描信号用GenPix pro 3.0软件分析,利用CLASTER操作系统分析结果 ,TREEVIEW操作系统显示其结果 ,查阅SOURCE功能数据库进行每个基因的功能分析.结果 基因芯片的8096个基因中有意义的信号位点为194个,按功能分为11类,表达增加1倍以上的基因为52个,表达减少50%以下的基因为49个,其中表达水平高的基因为CTGF,其次为CYR61,IL-6等,均与创伤愈合有关.结论 SPC可通过刺激成纤维细胞基因表达的变化,使成纤维细胞分泌一系列与皮肤创伤愈合有关的细胞因子,调控其增殖,从而促进创伤愈合.
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神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和TIMP-1的影响
目的 研究神经鞘氨醇磷酸胆碱(shingosylphosphorylcholine,SPC)对体外培养人真皮成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探索在促进皮肤创伤愈合方面SPC的作用机制.方法 通过MTT的方法检测SPC在成纤维细胞增殖效率方面的作用.利用RT-PCR和Western blotting的方法检测体外培养人真皮成纤维细胞经5μmol/L SPC诱导后,表达损伤修复相关蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的情况.结果 一定浓度的SPC具有促进成纤维细胞增殖的作用.5μmol/L SPC具有上调成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3,TIMP-1 mRNA和蛋白的作用(P＜0.05).结论 实验证实体外培养人真皮成纤维细胞在经SPC干预后,其表达细胞外基质调节蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的作用得到增强,提示SPC具有促进皮肤创伤愈合的作用.
