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重组GnRH主动免疫公猪的效果及对垂体GnRH受体、FSHβ和LHβ基因表达的影响
目的:探讨重组GnRH六聚体-麦芽糖结合蛋白(MBP-GnRH-6)主动免疫的去势效果和对垂体GnRH受体、FSHβ和LHβ mRNA的影响.方法:7头公猪在9周龄时用重组GnRH主动免疫,放免法测血清睾酮浓度,ELISA法测抗体效价,实时荧光定量PCR分析垂体中GnRH受体、FSHβ和LHβ mRNA的变化.结果:重组MBP-GnRH-6主动免疫公猪后,血清GnRH抗体效价显著上升,且降低了外周血清睾酮浓度(P＜0.05),睾丸重量也明显下降((P＜0.01),组织切片显示,曲细精管仅有少数退化的精原细胞.免疫组公猪垂体中FSHβ mRNA和LHβ mRNA显著下降(P＜0.05),GnRH受体mRNA与阉割公猪相比差异显著(P＜0.05),但是与未阉割公猪相比差异不显著(P＞0.05).结论:公猪接种重组MBP-GnRH-6能诱发免疫反应,中和内源GnRH的生物活性,降低了垂体GnRH受体、FSHβ和LHβ基因表达,且抑制睾酮的合成,从而导致性器官发育受阻.
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大黄不同萃取物对大鼠下丘脑和腺垂体超微结构及其GnRH、GnRH-R和FSHβ表达的影响
目的:比较大黄不同萃取物对成年雌性大鼠下丘脑、腺垂体超微结构及功能的影响,筛选大黄具有生殖毒性的主要萃取物.方法:采用极性梯度萃取法制备大黄水提物的氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物.雌性成年大鼠随机分为正常对照组、大黄水提物组和各萃取物组,连续灌胃给药60天.采用透射电镜观察下丘脑、腺垂体超微结构病理变化;免疫组化法检测下丘脑弓状核中GnRH、腺垂体促性腺细胞中GnRH-R和FSHβ表达水平.结果:(1)超微结构:电镜下,与正常对照组相比,大黄水提物(生药4.0 g/kg)、氯仿(4.44 mg/kg)和乙酸乙酯萃取物(40.96 mg/kg)组均出现不同程度的病理变化,下丘脑弓状核神经元出现核仁增大,内质网、线粒体数目增多,同时伴有染色质边集和溶酶体增多;腺垂体促性腺细胞可见核膜断裂,线粒体肥大,内质网和高尔基体扩张,以及由粗面内质网组成的同心圆性膜性小体.正丁醇萃取物(79.43 mg/kg)和水溶物(835.72 mg/kg)组超微结构病变不明显.(2)大黄水提物(生药4.0 g/kg)组、氯仿(4.44 mg/kg)和乙酸乙酯萃取物(40.96 mg/kg)组GnRH和FSHβ表达明显高于正常对照组,大黄水提物(生药4.0g/kg)组GnRH-R表达明显低于正常对照组.大黄水提物(生药4.0 g/kg)组GnRH和FSHβ表达明显高于正丁醇萃取物(79.43mg/kg)和水溶物(835.72mg/kg)组,乙酸乙酯萃取物(40.96 mg/kg)组GnRH和FSHβ表达高于正丁醇萃取物(79.43 mg/kg)组,其余各组间比较差异均无统计学意义.结论:氯仿(4.44 mg/kg)和乙酸乙酯萃取物(40.96mg/kg)具有与大黄水提物相类的毒性作用,是大黄主要的生殖毒性萃取物.
