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重组蓖麻毒素A链文献资料
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rRTA:DS27免疫毒素的制备及胞内运输研究
目的:探讨免疫毒素rRTA:DS27的内化行为.方法:用原核系统来获得重组蓖麻毒素A链(rRTA);用胶体金双标记法进行Molt4细胞中免疫毒素的导向研究.结果:CM-Sephorose一步纯化到电泳纯的rRTA,电镜观察到rRTA:DS27遵循特异的胞内运输途径.结论:上述结果对于深入了解免疫毒素的作用机理,并进而改善其临床应用具有重要作用.
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重组蓖麻毒素A链的融合表达、纯化及活性研究
目的: 制备有高生物活性的重组蓖麻毒素A链蛋白(RTA). 方法: 在RTA序列的C末端引入KDEL信号肽, 克隆到含有硫氧还蛋白(Trx)的融合表达载体pET32a中, 转入大肠杆菌BL21, 在低温(20℃)下用低浓度(0.4 mmol/L)IPTG诱导重组质粒进行表达.表达上清用钴离子亲和层析柱进行纯化, 20～100 mmol/L咪唑溶液洗脱目的蛋白.纯化蛋白经SDS-PAGE电泳与Western blot鉴定后, 对pUC19质粒进行超螺旋dsDNA裂解研究. 结果: 每升细菌培养物回收约60 mg 的纯化蛋白, 纯度大于90%, Mr约45 000, 且3 μg纯化蛋白即可以对1 μg超螺旋dsDNA产生明显的裂解活性. 结论: 利用pET32a表达系统可以快速获得大量有高生物活性的可溶性RTA-Trx融合蛋白.
关键词： 重组蓖麻毒素A链 融合表达 钴离子亲和层析 裂解超螺旋dsDNA
