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约氏疟原虫感染早期小鼠免疫应答的实验研究
目的:探讨约氏疟原虫感染早期小鼠免疫应答的差异性.方法:约氏疟原虫腹腔感染DBA/2、BALB/c和C57BL/6小鼠,制备薄血膜,姬姆萨染色,计数红细胞感染率;通过ELISA和Griess实验分别检测脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和一氧化氮(NO)水平.结果:感染第3 d之后,DBA/2小鼠的虫体血症水平显著低于BALB/c和C57BL/6小鼠;将疟原虫寄生的红细胞(PRBC)和脂多糖(LPS)或IFN-γ分别与3种感染第3 d小鼠脾细胞共同培养后,DBA/2小鼠脾细胞培养上清中的IFN-γ和NO水平明显高于BALB/c和C57BL/6小鼠.结论:约氏疟原虫感染早期,不同遗传背景小鼠在Th1型细胞免疫应答的建立和巨噬细胞活化方面存在显著差异.
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HCV-NS3重组腺病毒转染树突状细胞体内诱导抗原特异性Th1应答的研究
目的:探讨表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白(NS3)基因的重组腺病毒转染树突状细胞体内诱导特异性Th1细胞免疫应答.方法:分离培养小鼠骨髓树突状细胞,制备表达HCV-NS3蛋白的重组腺病毒转染树突状细胞(DC-AdNS3)疫苗,采用流式细胞术和免疫印迹法分析鉴定细胞及抗原蛋白表达.采用腹腔注射途径免疫接种BALB/c小鼠两次,每次间隔10天,3×105细胞/次.末次接种10天后,采用ELISPOT法和ELISA法分别测定脾NS3特异性分泌IFN-γ的T细胞反应以及细胞因子水平.结果:重组腺病毒转染DC可刺激DC成熟,同时可在DC内成功表达NS3蛋白.小鼠两次接种DC-AdNS3产生明显升高的分泌IFN-γ的T细胞反应(P＜0.01),脾T细胞悬液内可测得高水平的IL-2和IFN-γ(P＜0.01)以及显著降低的IL-10(P＜0.05).结论:DC-AdNS3疫苗可在BALB/c小鼠体内激发产生抗原特异性的Th1细胞免疫应答,为抗HCV感染的疫苗研究提供参考依据.
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左旋精氨酸通过活化树突状细胞增强约氏疟原虫感染DBA/2小鼠的Th1应答效应
探讨左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL,P.y17XL)感染DBA/2小鼠Th1免疫应答的调节效应.方法 DBA/2小鼠随机分为两组,对照组和Larg组,每组20只,分别给予DBA/2小鼠生理盐水和L-Arg( 1.5 g/kg)连续灌胃预处理7d后,每鼠经腹腔感染1×106个P.y17XL寄生的红细胞(pRBC).统计两组小鼠红细胞感染率和小鼠存活率.感染后第0、3和5天每组分别处死4只小鼠,取脾组织制备脾细胞悬液,流式细胞术检测CD4+CD69+T细胞、F4/80+CD36巨噬细胞、髓样树突状细胞mDCs (CD11c+CD11b)、浆样树突状细胞pDCs (CD11c+B220+)数量,ELISA法检测脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平,Griess反应检测脾细胞培养上清中一氧化氮(N0)含量.结果 与对照组(45％)比较,L-Arg组小鼠的高红细胞感染率降到20％,自愈时间从22d缩短到20d.感染后第3天,L-Arg组小鼠CD4+CD69+T细胞数量[(11.27±0.97)％]、IFN-γ分泌水平[(767.86±20.56) pg/ml]、F4/80+CD36+巨噬细胞数量[(36.46±1.33)％]、NO产生水平[(78.66±2.89) μmol/L]、mDCs和pDCs数量[(10.02±0.37)％和(9.01±0.53)％]均显著高于对照组[分别为(7.3±0.68)％、(485.84±39.31) pg/ml、(29.61±0.47)％、(42.51+1.32) μmol/L]、(5.51±0.87)％和(5.60±0.85)％](P＜0.05),而感染后第5天均无明显差异.结论 L-Arg预处理可促进DCs的活化,从而促进DBA/2小鼠于感染早期Th1免疫应答进一步有效建立.
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左旋精氨酸通过上调Th1应答介导抗疟保护性免疫
目的 探讨左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL,P.y17XL)感染BALB/c小鼠Th1免疫应答的调节效应.方法 于P.y17XL感染前7天,连续每日给予BALB/c小鼠L-Arg(1.5 g·kg-1体质量)灌胃预处理;动态观察各组感染小鼠原虫血症水平和生存率;于感染后d 0、d 3和d 5分别提取小鼠脾细胞,流式细胞术检测BALB/c小鼠CD4+CD69+T细胞、F4/80+CD36+巨噬细胞数量;ELISA 法检测脾细胞培养上清中IFN-γ的分泌水平,Griess反应检测脾细胞培养上清中NO含量.结果 与NC组比较,L-Arg能够降低感染小鼠的原虫血症水平,延长生存时间.L-Arg组CD4+CD69+T细胞数量出现有意义的增加,IFN-γ分泌水平明显提高,F4/80+CD36+巨噬细胞数量出现明显升高,NO的分泌也明显增加.结论 在感染早期L-Arg处理可诱导Th1免疫应答的有效建立,明显遏制P.y17XL感染早期红内期疟原虫的感染进程.
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日本血吸虫Calpain疫苗候选分子抗感染的免疫机制
目的 探讨日本血吸虫疫苗候选分子-钙离子激活的中性蛋白激酶(Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制.方法 用重组纯化的Calpain抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗Calpain血清,抗Calpain血清与机械转化的日本血吸虫童虫和来自于同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养,观察细胞对血吸虫童虫的粘附及对童虫的杀伤效果;RT-PCR分析Calpain抗原免疫BALB/c小鼠一氧化氮激酶(iNos.eNos.nNos)mRNA的表达;ELISA分析免疫小鼠体外培养脾细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-4.结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体,此抗体介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的粘附,37℃、5%CO2培养48 h后,33.8%的日本血吸虫童虫被杀死,与控制组14.5%的自然死亡率相比有一个显著性的增高(P＜0.01);RT-PCR测定重组Calpain抗原免疫1周小鼠iNos mRNA的表达显著性的增强,培养24 h脾细胞上清中IFN-γ浓度高于对照组.结论 Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用,Calpain抗原能够诱导IFN-γ的产生,提示Calpain诱导Th1的免疫应答反应来抗日本血吸虫的感染.
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Calpain免疫BALB/c鼠后IFN-γ和IF-4水平的动态变化
目的 探讨弓形虫疫苗候选分子-钙离子激活的中性蛋白激酶(calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制.方法 用重组纯化的Calpaln抗原免疫BALB/c小鼠,RT-PCR分析Calpain抗原免疫BALB/c小鼠一氧化氮激酶(iNos.eNos.nNos)mRNA的表达;ELISA分析免疫小鼠体外培养脾细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-4的动态变化.结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后.RT-PCR测定重组Calpain抗原免疫1周小鼠iNos mRNA的表达显著性的增强,培养24h免疫鼠脾细胞上清中IFN-γ浓度显著性的高于对照组,而IL-4的产生在免役组与对照组差异无统计学意义.结论 Calpain抗原能够诱导IFN-γ的产生,提示Calpain诱导Th1的免疫应答反应来抗弓形虫的感染.
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含CpG基序的寡脱氧核苷酸联合乙型肝炎表面抗原免疫转基因小鼠的实验研究
有研究表明,含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对天然和获得性免疫系统具有广泛的刺激作用,在动物体内可作为多种外源抗原,包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的Th1型免疫佐剂,达到增强体液免疫及细胞免疫的作用,而Th1型免疫反应对乙型肝炎病毒(HBV)的清除是必要的,因此CpG ODN联合HBsAg可望成为慢性乙型肝炎的有效治疗性疫苗.
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李斯特菌上调约氏疟原虫感染鼠疟模型的Th1应答效应
目的 探讨李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)对致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL P.y 17XL)感染小鼠的免疫应答调节机制.方法 小鼠腹腔注射感染疟原虫2d后尾静脉分别接种Lm及热灭活李斯特菌(heat-killed Lm,HKLm),对照组单独感染疟原虫,统计小鼠虫血症及生存率.感染后处死小鼠,流式细胞术检测脾细胞内细胞因子IFN-γ,Real-time PCR检测细胞因子IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ分泌水平,Griess反应检测脾细胞上清中一氧化氮(N0)含量.结果 与对照组相比,Lm接种组的虫血症水平明显降低,P.y 17XL感染后5d,CD4+、CD8+T细胞分泌的IFN-γ水平明显升高,巨噬细胞活化,NO产生增加.P.y17XL感染后3 d(Lm接种后1d),Lm接种组比HKLm接种组IFN-γ水平升高显著,HKLm接种组虫血症水平与对照组基本一致.结论 本研究表明Lm通过增强P.y 17XL感染小鼠的Th1应答对疟疾感染起到一定的免疫保护作用,并且这种保护作用与感染早期诱导IFN-γ分泌有关.这对于进一步以Lm为疫苗载体或佐剂研制抗疟新药具有重要的科学指导意义.
