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改良TCA/丙酮沉淀法去除肥胖人群血浆中的高丰度蛋白质
目的 对传统的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法进行改良,探索一种较好的高脂血浆的高丰度蛋白去除方法.方法 分别用不同体积(1、3、4、5、6、8、10和20倍样品体积)、不同TCA浓度(10％、30％、40％、50％、60％、70％)的TCA/丙酮溶液处理高脂血浆处理所得上清和沉淀蛋白样品分别进行一维十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证比较,确定去除效果佳的TCA/丙酮溶液,用该浓度TCA/丙酮溶液与含有10％三氯乙酸的TCA/丙酮溶液同时处理血浆,对所得沉淀蛋白进行二维SDS-PAGE验证,并对所得上清和沉淀蛋白质进行Nano HPLC-Chip-MS/MS鉴定比较.结果 4倍样品体积的TCA/丙酮溶液去除高丰度蛋白的效果较好,增加或减少TCA/丙酮溶液的体积都会影响去除效率；60％ TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效率比10％、20％、30％、50％ TCA/丙酮好,而70％ TCA/丙酮溶液处理血浆的重复性较差.质谱鉴定结果显示,4倍样品体积的60％ TCA/丙酮溶液与10％ TCA/丙酮溶液处理后的血浆样品相比,可鉴定更多的低丰度蛋白质.结论 用4倍样品体积的60％ TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效果为理想,尤其适用于较高脂含量的样品的处理.
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TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析
目的 对TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中的微量蛋白进行测量的效果进行分析.方法采用随机抽样的方法,抽取2007年9月～2010年9月就诊的进行尿液标本检测的患者90例,再将其随机分为A、B、C3组,平均每组30例.A组采用丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定;B组患者采用CAN/TFA沉淀法对微量蛋白进行测定;C组患者采用TCA/丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定.对三组的测量结果进行比较分析.结果分析结果表明,C组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显高于其他两组患者,差异有显著的统计学意义(P<0.01);A组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显低于其他两组患者,有显著的统计学意义(P<0.01).结论采用TCA/丙酮沉淀法对尿液微量蛋白含量进行测量的效果比较理想,具有操作简单、高效等特点,可以作为临床对患者进行尿液微量蛋白测量的首选方法,值得进一步推广.
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TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白效果分析
目的：探讨TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白检出的效果。方法：患者尿液标本150份随机均分为A组、B组和C组，分别行TCA/丙酮沉淀法、CAN/TFA沉淀法、丙酮沉淀法检测。结果：三组间蛋白回收率和所得蛋白点数均值比较：TCA/丙酮沉淀法组高，丙酮沉淀法组低，三组间均数两两比较显示，TCA/丙酮沉淀法与CAN/TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法与丙酮沉淀法、CAN/TFA沉淀法与丙酮沉淀法组间差异均有统计学意义。结论：TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白检测敏感性强，准确性高。
关键词： 尿液微量蛋白 TCA/丙酮沉淀法 CAN/TFA沉淀法
