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牛跟腱胶原蛋白提取工艺的生物安全性研究
目的 探讨牛跟腱胶原蛋白提取工艺的生物安全性.方法 以牛跟腱为材料,用酶-酸法进行粗提,结合高效液相色谱进行胶原蛋白的分离纯化;通过小鼠急性毒性试验、大白兔致敏试验、细胞毒性试验、热源实验,对自制胶原蛋白的整体水平和细胞水平的生物安全性进行评价.结果 经纯化的胶原蛋白液成分无全身毒性.皮肤致敏试验表明,该物质不具有引起接触性皮肤变态反应的可能性.细胞毒性试验显示,纯化胶原蛋白液对L-929小鼠成纤维细胞的细胞毒性为I级,热源反应为阴性.结论 利用酶-酸法和高效液相色谱制备相结合的方法,具有高效性、高选择性和易放大性;生物安全性试验表明,该方法提纯的胶原蛋白无毒副作用.
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胶原蛋白海绵病毒灭活/去除工艺的研究
目的 对牛跟腱来源胶原蛋白海绵的病毒灭活/去除工艺进行验证. 方法 根据生产所用原料牛跟腱确定其可能病原体种类,选择水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、小鼠脑脊髓炎病毒(theiler,s mouse encephalomyelitis virus,TEMV)、伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)和猴空泡病毒40 (simian vacuolating virus 40,SV40)作为指示病毒体:依据《消毒技术规范》中的方法制备病毒悬液.对胶原蛋白海绵的加工工艺进行分析,确定胶原蛋白海绵以25 kGy60Co辐照处理作为可灭活/去除病毒的工艺,并测定半数细胞感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50),以病毒降低系数(处理前后样本平均检测值对数之差)对病毒灭活/去除效果进行验证. 结果 经辐照灭菌处理后,VSV、TEMV、PRV和SV40病毒降低系数分别为5.646、4.792、5.042、5.292 logTCID50/0.1 mL (logs).各指示病毒的降低系数均＞4 logs,表明25 kGy60Co辐照灭菌工艺能有效灭活/去除病毒. 结论 25 kGy60Co 辐照处理工艺可作为牛跟腱来源的胶原蛋白海绵制备过程中病毒灭活/去除工艺,能有效保证产品的安全性.
