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金黄色葡萄球菌肠毒素C3单克隆抗体的制备与鉴定
目的 制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定.方法 以SEC3重组蛋白免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术将小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法检测筛选及2次有限稀释法克隆化培养,获得目的杂交瘤细胞株,并对其所产生的单克隆抗体进行效价、亲和常数及抗原识别表位等相关性质的鉴定.结果 终获得了两株能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞1C12和2A2,两者细胞培养上清的效价分别为1∶3 200和1∶1 600.经分析可知1C12细胞株的亲和力高于2A2细胞株,同时相加实验表明两个单克隆抗体识别抗原表位相同.结论 单克隆抗体制备成功,为进一步完善肠毒素SEC3的临床检测奠定了基础.
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Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响
目的 探讨栓链因子复合物亚基Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响.方法 体外培养人气道上皮细胞16HBE,随机分为8组:空白对照组、表皮生长因子受体磷酸化抑制剂AG1487组、Sec3 siRNA组、阴性siRNA对照组、NE组、NE+AG1478、NE+ Sec3 siRNA组、NE+阴性siRNA组,采用ELISA、RT-PCR法分析上清液MUC5AC的相对含量及细胞中MUC5AC mRNA水平;Western blot法检测Sec3蛋白及pEGFR的相对含量.结果 单纯NE刺激组上清液中MUC5AC含量,细胞中MUC5AC mRNA、pEGFR水平显著高于空白对照组(P＜0,01),AG1487可明显抑制上述刺激作用;转染Sec3 siRNA可阻断MUC5AC分泌(P＜0.01),但并不影响其转录水平(P＞0.05).结论 在NE诱导的人气道上皮黏液高分泌过程中,栓链因子复合物亚基Sec3对黏蛋白出胞有重要的介导作用.
关键词： 黏蛋白类 中性粒细胞弹性蛋白酶 栓链因子复合物 SEC3 表皮生长因子受体
