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miR-15家族促进CD133+胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭
背景:一些研究表明,CD133是包括胰腺癌在内的多种肿瘤细胞的干细胞标记,与癌症的预后不良有关.miR-15家族参与凋亡、细胞分化与周期调控、应激等重要细胞功能活动的调节,具有潜在的干预价值.目的:探讨miR-15家族对CD133+胰腺癌干样细胞迁移和侵袭的影响.方法:首先构建高迁移性胰腺癌细胞亚系CD133+Capan-1M9,经鉴定具有干样细胞特征,在此基础上通过慢病毒转导的方式构建过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c的CD133+Capan-1M9细胞系,同时将稳定转染NC-miRNA的细胞系作为阴性对照组.qRT-PCR检测过表达细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达情况及上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA表达;MTT法检测过表达细胞系增殖能力和吉西他滨抗性;球体形成实验检测过表达细胞系自我更新能力;细胞迁移和侵袭实验检测过表达细胞系的迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达细胞系中上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素表达.结果与结论:①与阴性对照组相比,过表达CD133+Capan-1M9细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达量分别升高了8.3,10,9.5倍,而纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA和蛋白表达也显著升高(P<0.05);②过表达CD133+Capan-1M9细胞系增殖能力与阴性对照组相比差异无显著性意义(P>0.05),而对吉西他滨的抗性显著增强(P<0.05);③与阴性对照组相比,过表达CD133+Capan-1M9细胞系的球体数量和体积没有显著变化(P>0.05);④与阴性对照组相比,过表达CD133+Capan-1M9细胞系的细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05);⑤miR-15家族能够调控上皮-间质转化进而促进CD133+胰腺癌干样细胞的迁移与侵袭.
