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miRNA-520a-3p调控MAP3K2表达对肺癌干细胞凋亡的影响
背景:有研究证实,miRNA-520a-3p在肺癌干细胞中有一定调节作用,但具体功能和作用机制尚不明确.目的:探索miRNA-520a-3p对肺癌干细胞凋亡的影响,并对其作用机制进行初步研究.方法:采用免疫磁珠法从肺腺癌细胞株A549中分离出CD133+肺癌干细胞.实时荧光定量PCR检测miRNA-520a-3p在CD133+肺癌干细胞中的表达.采用脂质体转染法增加CD133+肺癌干细胞中miRNA-520a-3p表达水平,流式细胞术检测过表达miRNA-520a-3p对CD133+肺癌干细胞凋亡的影响.双荧光素酶报告基因实验检测 miRNA-520a-3p 对 MAP3K2基因的调控作用.Western Blotting 检测过表达 miRNA-520a-3p 对CD133+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2和Caspase-3 蛋白表达的影响.结果与结论:①在CD133+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p表达水平显著低于CD133-肺癌细胞(P < 0.05);②过表达miRNA-520a-3p后,显著增加了CD133+肺癌干细胞凋亡百分比(P < 0.05);③抑制miRNA-520a-3p表达能够显著增强含有 MAP3K2基因3'-非翻译区(3'-UTR)报告质粒的荧光素酶活性(P < 0.05),增加miRNA-520a-3p表达能够显著降低含有MAP3K2基因3'-UTR报告质粒的荧光素酶活性(P < 0.05);④过表达miRNA-520a-3p后,CD133+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2蛋白表达降低(P均 < 0.05),而Caspase-3蛋白表达增加(P < 0.05);⑤结果表明,在CD133+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p呈低表达状态.miRNA-520a-3p可能通过调控MAP3K2基因表达,诱导CD133+肺癌干细胞凋亡.
