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抗凝血纳米壳聚糖微球的合成、表征及生物安全性评价
背景：有研究显示，壳聚糖等天然多糖经磺化改性后具有类似肝素的抗凝功能，因磺酸化后的壳聚糖其形成的磺酸根基团与肝素的活性基团相似，具有良好的抗凝血性。目的：制备具有抗凝血功能的纳米壳聚糖微球，检测其形态结构、理化性能及生物安全性。方法：利用乳相法合成纳米壳聚糖微球，通过磺化反应合成磺酸化壳聚糖微球，通过透射电镜描述其形态特征，红外光谱观察其特异基团峰值变化。①凝血实验：分别将肝素、纳米壳聚糖微球及10，30，50 mg磺酸化壳聚糖微球加入SD大鼠血中，检测凝血指标。②溶血实验：分别将去离子水、生理盐水及10，30，50 g/L磺酸化壳聚糖微球浸提液加入兔2%红细胞悬液中，检测溶血率。③细胞毒性实验：分别采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基及10，30，50 g/L磺酸化壳聚糖微球的浸提液培养人脐静脉血管内皮细胞，72 h后检测细胞相对增殖率及毒性分级。结果与结论：扫描电镜显示磺酸化壳聚糖微球具有良好的形态结构，粒径大小50 nm，红外图谱提示存在磺化取代。体外凝血实验表明磺酸化壳聚糖微球具有显著抗凝血作用，抗凝血效果呈剂量效应关系。磺酸化壳聚糖微球符合国标关于溶血率小于5%的安全标准，无致溶血性。细胞毒性实验表明磺酸化壳聚糖微球浸提液无明显细胞毒性，其生物安全性符合国家标准。
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重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究
目的 对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-IHI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法 对包涵体蛋白纯化复性的工艺.方法 工程菌pET28a-IHI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干爆,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验.结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液终可得到人胰岛素140mg.结论 该工艺耗时短,效果好,成本较低.
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槲皮素磺酸化衍生物合成及其体内外抗肿瘤研究
目的 合成槲皮素磺酸化衍生物(QSA),并探究其体内外抗肿瘤作用.方法 于槲皮素5'位引入了磺酸基合成QSA;高效液相色谱(HPLC)法测定其溶解度;MTT法检测QSA和槲皮素(0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0和100.0μtg/mL)对4T1、HeLa和HepG2细胞的增殖抑制作用,计算其半数抑制浓度(IC50);制备4T1荷瘤小鼠模型,随机分成6组(每组8只),分别为模型(iv生理盐水)组,紫杉醇(PTX)注射液(阳性对照,8 mg/kg,iv给药)组,QSA高、中、低剂量(70、45、20 mg/kg,iv给药)组,槲皮素(70 mg/kg,ig给药)组.iv组每2天给药1次,ig组每天给药1次,隔天监测体质量和肿瘤体积.iv给药7次后将小鼠处死,称瘤质量并计算抑瘤率,同时剖取获取肝和脾,计算肝、脾指数.结果 合成产物QSA的溶解度是槲皮素的4 261倍;QSA对3种肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,与槲皮素IC50值无显著性差异,其中对4T1细胞的抑制效果优;体内抑瘤实验结果显示,各给药组与模型组比较,均对小鼠瘤体积增长发挥显著抑制作用(P＜0.001);槲皮素(70 mg/kg)组抑瘤率为18.64％,QSA 45 mg/kg组抑瘤率高,为55.37％,与PTX注射液组(55.03％)无显著性差异,具备成药性.各组小鼠体质量、肝脾指数均无显著性差异,表明QSA安全性较高.结论 槲皮素经磺酸基修饰后解决了水不溶陛,体内抗肿瘤活性显著改善,为结构相近的黄酮类药物解决给药问题提供了新思路.
