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自噬与骨髓间充质干细胞放射损伤的关系
背景：骨髓间充质干细胞在造血干细胞致死放射剂量下却能够存活，并且仍能维持典型的干细胞特性，促进放射后的造血恢复，而自噬是细胞在应激状态下重要的适应性调控机制，可能参与骨髓间充质干细胞的放射耐受。目的：探索放射诱导的自噬与人骨髓间充质干细胞在放射损伤过程中的关系。方法：取体外培养的处于对数生长期的第3代骨髓间充质干细胞，随机分为对照组、3-甲基腺嘌呤组、雷帕霉素组、照射组、照射联合3-甲基腺嘌呤组和照射联合雷帕霉素组，3-甲基腺嘌呤组和雷帕霉素组细胞分别使用5 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和200 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素干预12 h，照射组细胞接受单剂量6 Gy X射线照射2 h，照射联合3-甲基腺嘌呤组和照射联合雷帕霉素组分别在接受相应药物干预12 h后，接受6GyX射线照射2h。结果与结论：对照组中自噬泡阳性细胞及凋亡细胞所占比例均较低；照射组中自噬泡阳性细胞及凋亡细胞比例较对照组均明显升高，且可见较高比例的自噬+凋亡细胞；应用3-甲基腺嘌呤后，自噬泡阳性细胞比例明显下降，凋亡细胞比例明显升高，但自噬+凋亡细胞比例与照射组相比无显著差异；而给予雷帕霉素后发现自噬泡阳性细胞显著高于照射组，但凋亡细胞比例与照射组相比无明显差异，并且未观察到自噬+凋亡细胞。对照组与3-甲基腺嘌呤组微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ蛋白表达水平均很低；雷帕霉素组与照射组微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ蛋白表达水平较对照组均明显升高，但照射组低于雷帕霉素组；照射联合3-甲基腺嘌呤组微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ蛋白表达明显低于照射组，但仍高于对照组，照射联合雷帕霉素组微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ蛋白表达较照射组和雷帕霉素处理组均明显升高。提示自噬可能对骨髓间充质干细胞具有放射保护作用。
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叉头转录因子O亚家族1及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ在肝癌组织的表达及意义
目的 探讨叉头转录因子O亚家族1(FoxO1)蛋白及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)在肝癌组织中的表达及意义.方法 免疫组织化学超敏二步法分别检测52例肝癌组织、30例癌旁组织及16例正常肝组织中FoxO1及LC3-Ⅱ蛋白的表达,分析两者表达与各临床病理因素的关系以及两者表达的相关性.结果 FoxO1在肝癌、癌旁及正常肝组织中表达主要定位于细胞核,肝癌组FoxO1阳性表达率(46.15％)低于癌旁组(76.67％,P＜0.05),癌旁组阳性表达率低于正常组(81.25％,P＞0.05);LC3-Ⅱ蛋白在肝癌、癌旁及正常肝组织中表达主要定位于细胞质,肝癌组织中LC3-Ⅱ阳性表达率(40.38％)低于癌旁组(70.00％,P＜0.05),癌旁组阳性表达率低于正常组(75.00％,P＞0.05).FoxO1及LC3-Ⅱ在肝癌组织中的阳性表达分别与肿瘤大小、Edmondson分级、TNM分期呈负相关(P＜0.05);FoxO1与LC3-Ⅱ在肝癌组织中的表达呈正相关(rs=0.496,P＜0.01).结论 肝癌组织自噬活性降低,FoxO1及LC3-Ⅱ表达下调可能参与了肝癌的发生发展过程.
关键词： 癌 肝细胞 叉头转录因子O亚家族1 微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ 自噬 -
人肾小管上皮细胞necroptosis模型的构建
目的:以体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)为靶细胞,构建肾小管上皮细胞凋亡样坏死(necroptosis)的模型.方法:采用肿瘤坏死因子α(tumor nercosis factor α,TNF-α)诱导细胞凋亡,同时采用抗霉素A(antimycin A)耗竭ATP,构建肾小管上皮细胞凋亡的模型,并以caspase-8抑制剂苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮(benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone,zVAD-fmk)阻断凋亡,用necroptosis的特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)阻断necroptosis,观察细胞在不同的处理下形态学的变化,同时检测细胞存活率及标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达.结果:(1)在TNF-α+zVAD- fmk+antimycin A处理1 h时细胞及细胞器膨胀,电镜下细胞膜碎裂,线粒体变圆、肿胀,嵴逐渐模糊,胞浆中出现大量自噬小体,而Nec-1预处理后细胞的坏死程度较对照组明显改善.(2)在TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A 1 h实验组,Nec-1预处理后细胞的存活率显著增加(P<0.05).(3)TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A干预1 h实验组在Nec-1预处理后LC3-Ⅱ的表达量明显下降(P<0.05).结论:凋亡环境中阻断凋亡可以诱导肾小管上皮细胞necroptosis,抑制剂Nec-1能特异性阻断肾小管上皮细胞发生坏死.
