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C57BL/6近交系小鼠Lewis肺癌动物模型:建设性描述肺癌损害程度的指标
目的:建立肺癌动物模型,探讨肺癌的致病因素,发病机制及防治措施. 方法 :将传代培养的 Lewis肺癌细胞接种于 C57BL/6小鼠腋部皮下,制备肺癌模型.观测佳接种剂量,成瘤率,发瘤平均潜伏期,平均存活时间,平均瘤重,肿瘤体积动态变化,彩色多普勒能量图( CDE)检测瘤内血流丰富程度及病理组织学观察. 结果 :佳接种剂量为 1× 106个细胞,成瘤率 80%,发瘤平均潜伏期为( 6.3± 0.4) d;平均存活时间为( 28.0± 2.5) d;平均瘤重( 9.13± 0.03) g; CDE: 70%为Ⅲ级, 30%为Ⅳ级,频谱 (PS)为 75.30 cm/s,阻力指数( RI)为 0.45. 结论 :Lewis肺癌细胞诱发肺癌模型在实验肺肿瘤研究中可作为首选造模方法.
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双歧杆菌脂磷壁酸对 B16 荷瘤小鼠 Fas/FasL 表达的影响
目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid of bifidobacterium,BLTA)对黑色素瘤B16小鼠Fas/FasL表达的影响. 方法将黑色素瘤B16细胞接种于C57BL/6小鼠(n=40)皮下,待触及肿块后于荷瘤小鼠瘤周注射不同剂量的BLTA.实验动物分为4组,每组10只:生理盐水(对照)组、低浓度BLTA(50 mg/L BLTA)组、中浓度BLTA(100 mg/L BLTA)组、高浓度BLTA(150 mg/L BLTA)组.采用MTT法检测荷瘤小鼠CTL杀伤活性;免疫组织化学染色检测肿瘤组织浸润的CD4+ 、CD8+ 淋巴细胞的表达情况;用RT-PCR检测肿瘤组织和脾脏组织Fas、FasL mRNA 的表达变化;免疫组织化学染色和Western blot检测肿瘤组织和脾脏淋巴细胞Fas、FasL 蛋白的表达变化. 结果 与对照组比较,BLTA处理各组荷瘤小鼠的CTL杀伤率明显增加(P<0.05),肿瘤组织内Fas、FasL mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),而荷瘤小鼠脾脏组织的Fas 、FasL mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05),肿瘤组织内CD8+淋巴细胞的浸润增多(P<0.05),并具有剂量依赖性. CD4+淋巴细胞的浸润无明显增加(P>0.05). 结论 BLTA能够通过调节Fas/FasL系统,增强CTL细胞的杀伤活性,促进肿瘤细胞的凋亡,逆转荷瘤小鼠的肿瘤免疫逃逸现象,进而提高机体的抗肿瘤作用.
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AMD3100 对 Lewis 肺癌进展及荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞积聚的影响
目的 观察趋化因子受体CXCR4拮抗剂AMD3100对Lewis肺癌进展及荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞(myeloid derived suppressor cells ,MDSCs)积聚的影响. 方法 60只荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠分为2组:PBS组(腹腔只注射PBS液,0.2 ml/只)、AMD3100组[腹腔注射溶解有2 mg/(kg*d) AMD3100的PBS液,0.2 ml/只,1次/d,共26 d],每组30只.隔日测2组小鼠体质量,记录成瘤时间.26 d随机处死2组荷瘤鼠各15只,剥离瘤体称量,观察肺转移灶数目,用免疫组化法计数瘤组织微血管密度(microvessel density,MVD),流式细胞仪测小鼠脾脏MDSCs比例;统计2组剩余小鼠自然生存天数. 结果 PBS组、AMD3100组小鼠Lewis肺癌成瘤时间分别为(8.03±1.47)、(9.97±1.50) d,接种瘤细胞后26 d瘤质量分别为(3.54±0.93)、(2.09±0.66)g,MVD值分别为(41.40±6.44)、(32.47± 5.33)个/HP,肺癌肺转移灶数目分别为(18.27±9.78)、(7.40± 5.83)个/只,MDSCs比例分别为(19.57±3.59)%、(31.42±5.04)%,中位生存时间分别是第29、34天,2组各项指标比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 AMD3100可延缓Lewis肺癌进展,但可能对荷Lewis 肺癌小鼠免疫产生一定的抑制作用.
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小鼠滑膜成纤维细胞的原代培养
目的：利用 C57BL ／6小鼠探索出一种改良的小鼠滑膜成纤维细胞（SF）的原代培养方法，以方便类风湿关节炎（RA）关于滑膜炎的研究。方法收集小鼠髋关节周围滑膜，去除内含的“蛋黄样”物，将滑膜移入含0．5％Ⅳ型胶原酶的 EP 管中，剪碎；置入37℃摇箱中振荡消化60 min ，然后在涡轮振荡仪上振荡1．5 min ，常规培养。结果细胞培养1周左右。进行第一次传代；大约在培养10 d 后滑膜巨噬细胞的数量达到高峰，然后逐渐减少；在第3次传代（15～20 d）后，滑膜巨噬细胞基本消失。用 Vimentin 标记的细胞免疫荧光化学染色显示 SF 细胞纯度超过95％；用 Vimentin 和 CD90．2标记的流式细胞术显示其纯度达到95％，用 CD54标记其纯度大约为80％。结论利用 C57BL／6小鼠探索出一种改良的小鼠 SF 的原代培养方法是一种简便易行的小鼠 SF 的原代培养方法。
