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抗人大肠癌单链抗体与绿色荧光蛋白融合基因的构建和表达
目的 构建并表达绿色荧光蛋白(GFP)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,产生具有荧光的抗体.方法 将鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的基因克隆到pET28a (+)-GFP的表达载体,转化到大肠杆菌E.coli BL21中进行融合基因ND- 1-scFv/GFP诱导表达.Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化,免疫印迹和荧光显微镜方法验证融合蛋白的表达.结果 ND-1scFv被克隆到表达载体pET28a(+)-GFP中,诱导表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量为58kDa.SDS-PAGE灰度扫描结果显示纯化后的蛋白纯度为90％,荧光显微镜检测显示,表达有目的蛋白的大肠杆菌BL21具有明显的绿色荧光.结论 成功构建并表达融合基因ND-1-scFv/GFP,为该单抗的肿瘤特异成像研究奠定了基础.
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超抗原葡萄球菌肠毒素与抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv融合基因的构建、表达及活性分析
目的:构建并表达超抗原葡萄(SEA)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-lscFv的融合蛋白,以提高SEA的靶向杀伤作用.方法:构建超抗原SEA和鼠抗人大肠癌单链抗ND-1 scFv的融合基因ND-1 scFv/SEA的表达载体,转化到大肠杆菌E.coli M15中进行诱导表达.Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化.间接免疫荧光法检测融合蛋白的靶向结合活性,MTT法检测靶向杀伤效率.结果:成功构建了融合基因ND-1 scFv/SEA,实现功能性表达,纯化的ND-1 scFv/SEA融合蛋白与表达有ND-1相应抗原的大肠癌细胞CCL-187有高度亲和活性,通过激活外周血单核细胞,可特异性杀伤靶细胞,在4 μg/mL浓度下对CCL-187的杀伤率达到91％,明显优于SEA的杀伤活性.结论:融合蛋白ND-1 scFv/SEA对大肠癌细胞CCL-187具有靶向结合和杀伤活性,为SEA用于靶向性的大肠癌治疗奠定了基础.
