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氧化应激损伤对内耳毛细胞内游离钙离子和钙调蛋白表达的影响
目的 通过分析氧化应激损伤的内耳毛细胞内游离Ca2+浓度和钙调蛋白(CaM)表达水平,探讨感音性耳聋的氧化应激损伤机制.方法 采用不同浓度(50 μmol/L、100 μmol/L、200μmol/L)双氧水染毒培养内耳毛细胞,24 h后检测细胞过氧化氢酶(CAT)活性,Fluo-3 AM荧光探针定量检测细胞内Ca2+浓度,免疫荧光法分析CaM表达水平.结果 氧化损伤的毛细胞CAT活性明显下降,随着染毒浓度的增加下降更明显(F=689.9,P＜0.01);氧化损伤毛细胞游离Ca2+浓度随着染毒浓度的增加而增加(F=716.107,P＜0.01);氧化损伤的毛细胞CaM表达水平明显增加,50 μmol/L和100 μmol/L H2O2染毒组随浓度增加表达增强,但200μmol/L H2O2染毒组表达水平有所回落(F=732.727,P＜0.01).结论 氧化应激损伤导致毛细胞内游离Ca2+浓度和CaM表达增加诱发细胞凋亡是多类型感音性耳聋的重要发病机制,严重的氧化应激损伤可抑制细胞CaM表达.
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侧脑室注射神经节苷脂钠对脑瘫模型大鼠学习记忆能力的影响
目的 探讨神经节苷脂钠(GM)侧脑室注射对脑瘫模型大鼠学习记忆能力的机制,为临床治疗脑瘫提供理论依据.方法 将36只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组和GM组.模型组和GM组大鼠通过切除大脑皮质及部分脑组织建模.成模后1d、10d、20 d、30 d用大鼠脑定位仪经大鼠侧脑室注射GM给药.在成模后和未次给药后用水迷宫仪进行空间探索实验、定位航行、悬吊、斜坡等实验,比较大鼠学习记忆能力及运动能力改变,并采用ELISA测定脑海马区乙酰胆碱(Ach)及眶静脉血乙酰胆碱脂酶(AChE)活性;脑组织液钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)及钙调蛋白(CaM).结果 与模型组比较,GM组大鼠治疗后找到平台时间及斜坡实验时间显著缩短;悬吊时间、第一象限和中环停留时间明显延长;定位航行中潜伏期、游泳距离缩短,脑海马区Ach含量降低、AChE活性增强;脑组织液CaMKⅡ及CaM增高(P＜0.05).结论 GM可明显抑制脑瘫模型大鼠脑组织液CaMKⅡ和CaM合成,降低神经细胞钙蛋白水解和钙内流,并通过阻断CaMKⅡ这一信号传导通路,提高AChE活性,抑制Ach释放来降低大鼠因脑缺血缺氧对中枢神经造成的损伤,使受损脑神经纤维修复和再生,进而促进中枢神经纤维功能恢复来提高学习记忆能力.
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过表达脑源性神经生长因子(BDNF)抑制血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心肌细胞凋亡
目的 研究脑源性神经生长因子(BDNF)在抗心肌细胞肥大凋亡病理过程中的作用及分子机制.方法 运用腹主动脉不完全结扎法构建心肌肥大动物模型,分离培养SD大鼠原代心肌细胞经血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导构建心肌细胞肥大的细胞模型;运用脂质体将BDNF过表达重组体(pcDNA5-BDNF)转染心肌细胞,免疫荧光染色检测BDNF转染后对心肌细胞表面积的影响;流式细胞术检测BDNF转染后对心肌细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测过表达BDNF对心肌细胞中心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽(BNP) mRNA水平的影响;Western blot法检测心肌组织和细胞中BDNF蛋白水平变化及BDNF过表达后心肌细胞ANP和BNP、钙调蛋白激酶2(CaMK2)、钙调神经磷酸酶(CaN)和磷酸化钙调神经磷酸酶(p-CaN)、活化T细胞核因子3(NFATC3)和磷酸化的活化T细胞核因子3(p-NFATC3)蛋白水平的变化.结果 BDNF蛋白在心肌肥大动物模型和AngⅡ处理的心肌细胞中显著升高并具有时间效应;与未转染对照组相比,BDNF过表达组心肌细胞的表面积、细胞凋亡率、ANP和BNP基因及蛋白表达水平、p-CaMK2和CaN蛋白水平显著降低,而p-NFATC3蛋白水平显著增加.结论 BDNF能够抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡,通过抑制CaMK2和CaN信号通路起作用.
