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乙型流感病毒的RT-PCR-SSCP法初筛分类
目的 应用单链构象多态性(SSCP)对乙型流感病毒血凝素重链区(HA1)基因抗原决定簇集中区进行突变筛选,了解2001～2004年天津地区流行株HA1基因的变异特性.方法 病毒培养液提取RNA后RT-PCR扩增HA1基因易发生变异308 bp片段,经SSCP分类,选取各类代表株PCR产物纯化后进行核苷酸序列测定,用DNAS-TAR软件分析.结果 天津地区近几年分离的乙型流感病毒根据SSCP电泳图谱不同分为5类.Victoria系易变区抗原表位有6个位点氨基酸不同于B/Hongkong/330/2001,Yamagata系易变区抗原表位有3个位点氨基酸不同于B/Beijing/76/98,有10个位点不同于B/Sichuan/379/99.Yamagata系与Victoria系相比缺失第163位氨基酸天冬酰胺(N).O相与D相毒株间未发现氨基酸有差异.结论 RCR-SSCP方法可作为初步筛查流感病毒代表株的方法.近几年天津地区乙型流感病毒两大谱系交替流行,且抗原性进一步发生漂移,Yamagata系毒株为B/Beijing/76/98类似株.
关键词： 乙型流感病毒 单链构象多态性(SSCP) HA1基因 变异 -
银染单链构象多态性技术检测人IL-3基因突变
目的对人白细胞介素-3(hIL-3)基因突变体进行分析和进一步鉴定,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法-即银染单链构象多态性技术(Single strand conformation polymorphism,SSCP).方法将野生型和突变型的人白介素-3(hIL-3)cDNA连接到PUC9和PUC19质粒载体上,转化入大肠杆菌,扩增质粒,用常规方法抽提,酶切,然后将酶切后的DNA片段进行PAGE胶电泳,银染检测野生型和突变型的异同.结果以野生型hIL-3 cDNA作为对照,连接到PUC9和PUC19上的电泳结果均为一致,突变型hIL-3 cDNA的电泳带明显比野生型的电泳带靠后.结论 SSCP方法具有简便,快捷较灵敏的特点,对人白细胞介素-3(hIL-3)基因的点突变得到进一步的鉴定.
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p53蛋白表达和基因突变在所谓肺硬化性血管瘤组织中的意义
背景与目的所谓肺硬化性血管瘤(so-called pulmonary sclerosing hemangioma,PSH)是一种至今不能肯定其来源及性质的少见肺肿瘤.虽然目前普遍认为PSH是一种良性肿瘤,但却发现有少数PSH可发生浸润和转移.p53蛋白表达和基因突变是反映肿瘤生物学行为的有用指标.本研究的目的是检测PSH组织中p53基因突变及p53蛋白的表达情况及其意义.方法应用免疫组化S-P法、激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术、单链构象多态性(single stranded conformation polymorphism,SSCP)及DNA测序分析方法(5～8外显子)检测19例PSH中多角形细胞和表面立方细胞的p53蛋白表达和基因突变情况.结果19例PSH组织中p53蛋白阳性表达率为21.1%(4/19),SSCP及测序分析检测p53基因突变率分别为26.3%(5/19)和42.1%(8/19).p53蛋白阳性表达的4例PSH组织,测序分析显示3例标本有突变发生,2例为错义突变,1例同时发生错义突变和移码突变;而p53蛋白阴性表达的15例PSH组织中,5例标本经测序证实亦发生了突变,4例为移码突变,1例为错义突变.在有突变的8例PSH组织中,单一多角形细胞突变5例,单一立方细胞突变2例,多角形细胞和立方细胞同时突变1例.结论PSH组织p53蛋白阳性表达并不能完全反映p53基因突变的真实情况;p53基因突变或蛋白表达异常均可发生在PSH组织中的两种不同的细胞内;p53基因的高突变率提示PSH可能具有潜在的恶性生物学行为.
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抗孕激素药物敏感性与孕激素受体基因多态性关系的研究
目的:研究孕激素受体基因多态性与抗孕激素药物敏感性的关系.方法:辽宁省部分地区因非意愿妊娠要求药物流产孕妇185例,根据对药物的临床反应情况将其分成正常完全流产组、敏感组、不全流产组及失败组并进行血清激素水平测定;采用PCR-SSCP方法筛查孕激素受体基因上具有遗传学意义的3个单核苷酸多态性位点(G1031C Ser344Thr;G1978T Leu660Val;C2310T His770His)在各组中的分布情况.结果:PCR扩增的DNA片段经变性成单链,并进行电泳后,各组显示的条带完全一致,说明3个SNP位点在各组中的分布不存在差异.结论:这3个孕激素受体基因的SNP位点在所调查的辽宁省女性中对于抗孕激素药物反应敏感性的影响没有统计学意义.
