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LDH酶释放测定NK细胞活性的几点建议
天然杀伤(NK)细胞的活性与机体抗肿瘤能力关系密切,是机体非特异性防御机能的重要组成部分之一.NK细胞活性的测定方法,多年来一直采用同位素释放法,因此应用上受到限制.近年来乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法,以其测定方法的简便性、灵敏性、可靠性,尤其是无同位素污染,使此项检测指标得到广泛应用.目前已确定LDH酶释放法为检测免疫功能性保健品的标准方法之一.我们用LDH酶释放法对化学性毒物、药品以及保健品等进行了免疫功能测.
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MTT显色反应实验条件分析
目的：检验分析MTT实验方法本底高、灵敏度低、稳定性差的影响因素，改进实验条件提高灵敏度和稳定性，降低本底。方法：用MTT比色方法，细胞毒试验及细胞增殖实验，分析比较不同条件下MTT显色反应的性能特点。结果：比较了13种溶剂对Formazan的溶解性能。分析检验了琥珀酸脱氢酶在细胞上的分布特点、pH值对MTT反应体系的影响、酚红和牛血清对检验结果的影响，提出相应对策。检测了MTT反应时间曲线和细胞活力曲线。分析了改进后的MTT实验方法的灵敏度和稳定性。结论：以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面。MTT反应体系的pH值为6.7，比较好的Formazan溶剂是正丙醇、异丙醇和乙二醇乙醚。去掉细胞培养上清，检测细胞上的酶，用溶剂使蛋白质变性，经沉淀去掉蛋白质影响，能使MTT实验方法的本底降低，灵敏度提高。通常情况下该方法检测K-562细胞和人淋巴细胞的灵敏度分别为1000和10000个细胞左右。
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酶反应比色法检测细胞介导的细胞毒作用的原理与问题
同位素标记法和酶反应比色法(如MTT比色法、NAG释放法)是检测CTL、NK细胞、LAK细胞等免疫效应细胞细胞毒作用的常用方法.由于后者有简便、经济及不使用放射性同位素等特点,近年来得到了广泛应用,但是它与同位素方法在测定原理上有本质的差别.根据检测原理、计算公式和癌症及癌症化疗患者效应细胞对靶细胞胞毒作用的检测结果,我们认为酶反应比色法并非普遍适用于检测细胞介导的细胞毒作用,特别对用细胞毒药物治疗的患者不宜用此法.
