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东亚钳蝎氯毒素对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 研究东亚钳蝎氯离子通道毒素(BmK CT)对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及其机制. 方法 制备融合蛋白GST-BmK CT,体外检测GST-BmK CT对胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响.以GST-BmK CT处理组为实验组,以GST处理组为阴性对照,PBS处理组为空白对照.MTT法分析各处理组U251细胞的增殖速度;流式细胞术分析U251细胞周期变化;蛋白免疫印迹法检测MAPKAPK-2的蛋白的磷酸化及其上游蛋白p38的磷酸化.预先使用p38α特异性抑制剂SB203580处理细胞,检测p38α活化对细胞周期阻滞的影响. 结果 MTT结果表明,融合蛋白GST-BmK CT体外处理U251细胞48 h和96 h,增殖抑制率分别为(25±1.9)％和(33±2.3)％,与GST处理组相比差异有统计学意义(P＜0.001).流式细胞检测结果表明,处理U251细胞96 h,GST-BmK CT组比空白对照组S期和G2/M期比例增多,差异有统计学意义(P＜0.005),GST阴性对照组相比空白组细胞周期各时相差异均无统计学意义(P＞0.05).蛋白免疫印迹结果显示GST-BmK CT能激活p38α丝裂原活化蛋白激酶(p38αMAPK),而用p38α特异性抑制剂SB203580能反转GST-BmK引起的细胞周期阻滞.结果进一步表明,BmK CT通过活化p38α激活下游丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2(MAPKAPK-2,MK2)从而引起细胞S期和G2/M期的阻滞. 结论 GST-BmK CT是通过p38αMAPK信号通路激活MK2来引起U251细胞周期在S期和G2/M期的阻滞,从而抑制细胞增殖.
关键词： 蝎氯毒素 神经胶质瘤 细胞周期阻滞 p38αMAPK信号通路
