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PM2.5对线虫热耐受性的影响及线虫喂饲菌灭活方法探索
目的 本研究探索以线虫的热耐受性指标为检测终点时,喂饲线虫的食物大肠杆菌OP50菌株的优灭活方法及其在液体培养体系中的适宜浓度.然后应用优化喂饲方法,评价PM2.5对线虫热耐受性的影响,为进一步开展PM25的线虫寿命影响及其分子机制研究奠定基础.方法 采用2种常见灭活方法(热处理和钴60照射)处理大肠杆菌OP50菌株,及未处理的活大肠杆菌OP50菌株(设为对照组)分别喂饲线虫,设定每组线虫的液体培养基(S-medium溶液)与加入细菌浓缩液(A=1.949)的体积比分别为1∶50和1∶100 2个水平.通过观察不同处理菌喂饲下线虫生长发育的基本形态学差异及喂饲5d后对热耐受性的影响来评价热处理、钴60照射处理菌组与对照活菌组之间的差异,从而确定不影响线虫生长发育且对毒性效应无干扰的大肠杆菌OP50菌的灭活方式及其适宜浓度.在此基础上,采用北京市冬季室外PM25水溶性样品(终浓度分别为A组94.587μg/ml、B组119.29 μg/ml),处理线虫5和10 d后观察其对热耐受性的影响.结果 热处理菌组喂饲的线虫体长较短,体宽较窄,生长较对照活菌组喂饲线虫缓慢,而钴60照射处理菌组喂饲的线虫生长状态和对照组差异无统计学意义.同时可见大肠杆菌OP50在液体培养基中所占比例为1∶100时线虫生长较1∶50时缓慢.染毒至第10天时,在热应激条件下阳性减寿组(2％葡萄糖)和PM2.5染毒处理组均可使线虫生存曲线左移.与空白对照组相比阳性减寿组平均生存时间缩短了48.43％(P＜0.01),PM2.5染毒处理组线虫平均生存时间分别缩短了26.29％(A组)和31.25％(B组)(P＜0.01).结论 钴60照射是线虫热耐受性实验研究中较合适的大肠杆菌OP50灭活方法,细菌浓缩液和液体培养基的体积比为1∶50优于1∶100,PM2.5作用下,线虫在热应激条件下平均生存时间缩短约1/3,提示PM2.5降低线虫的热耐受能力,有可能进一步影响线虫的寿命.
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以不同方式灭活的大肠杆菌OP50饲喂对秀丽隐杆线虫生长发育的影响
目的 比较两种不同方式灭活的大肠杆菌(OP50)对秀丽隐杆线虫生长发育的影响,以选择合适的灭活食物菌的方法.方法 分别采用热处理(65℃水浴)和钴60照射(2000 Gy)的方法灭活OP50,从秀丽隐杆线虫生长发育的影响、OP50的蛋白组成改变以及琥珀酸脱氢酶活性改变等角度评价热处理组、钴60照射组和对照组间的差异,从而确定有利于秀丽隐杆线虫生长发育的OP5O灭活处理方式.结果 钴60照射OP50组饲喂后,秀丽隐杆线虫的生长发育与对照组无差异,而热处理OP50组线虫的发育显著迟缓于对照组.同时噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiazol(-2-yl)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT]检测结果显示,热处理OP50的琥珀酸脱氢酶活性明显低于对照组和钴60照射组.结论 钴60照射是秀丽隐杆线虫实验研究中比较合适的OP50灭活方法.钴60照射和热处理OP50对秀丽隐杆线虫生长的差异可能由于OP50细菌中蛋白活性差异所致.本文为排除药物和毒物可能会间接通过影响OP50从而影响秀丽隐杆线虫的发育过程的干扰因素、提高基于秀丽隐杆线虫研究数据的可靠性提供了重要参考.
