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  1   材料
  Lewis肿瘤细胞株(购于中科院上海细胞库)。健康C57BL/6纯系小鼠雌雄各半,体质量(19±2)g,吉林省长春市生物制品研究所提供。核桃青皮2008-09采自吉林省磐石县核桃产区,吉林医药学院药学院药学教研室雷钧涛副教授鉴定为胡桃科核桃属植物核桃楸(Juglans mandshurica)的外青果皮。自然晾干后,在45℃左右的烘箱中烘干,粉碎过20目筛(孔径0.84mm),然后密封于塑料袋内,置冰箱中备用。
  2  方法
  2.1  造模将小鼠Lewis肺癌细胞置于含10%胎牛血清及DMEM的完全培养液中,在37℃、5%CO2培养箱中培养,2~3 d更换1次培养液,0.25%胰蛋白酶消化传代。细胞总数达到要求后,台盼蓝拒染法测定活细胞数>95%,调节细胞浓度为5×106个细胞/ml-1的细胞悬液备用。
  取40只小鼠,雌雄各半,体质量(18±1)g,于腋后线第6肋间胸腔接种,每只接种0.2 ml,细胞计数为5×106 个细胞/ml。建立小鼠肿瘤动物模型。
  2.2  核桃青皮提取液制备水提法制备核桃青皮提取液:称取1kg核桃青皮粗粉,按料液比1∶4加入蒸馏水,浸泡3d后倾出上清液,再加入新的蒸馏水冷浸,如此处理4次,将4次所得浸提液抽滤、减压浓缩得水提物浸膏110.45 g。
  醇提法制备核桃青皮提取液:用95%乙醇代替蒸馏水,按照以上的步骤,得到醇提物浸膏169.83 g。准确称取醇提浸膏5 g用适当氯仿溶解,定容于50 ml容量瓶,配成100mg·ml-1的溶液。准确称取水提浸膏5g用适当氯仿溶解,定容于50 ml容量瓶,配成100 mg·ml-1的溶液,用相同的方法配成200 mg·ml-1,300 mg·ml-1,400 mg·ml-1的溶液备用。
  2.3  动物分组造模2 d后随机分组,每组8只。生理盐水组(A组):给生理盐水0.2 ml腹腔注射,1次/d;其它各组分别用不同浓度(B组:100 mg·ml-1;C组:200 mg·ml-1;D组:300 mg·ml-1、E组:400 mg·ml-1)的水提物和醇提物0.2ml腹腔注射,1次/d。各组均连续给药15 d。第17天处死全部小鼠进行指标检测。
  2.4  观察项目瘤体积、瘤重 :用游标卡尺测量瘤体长径和短径,计算瘤体积,瘤体积=0.5ab2 (a长径,b短径)绘制增殖曲线。肿瘤抑制率(%)=(生理盐水组平均瘤重-给药组平均瘤重)/生理盐水组平均瘤重×100%。
  3  结果
  核桃青皮两种方法所得提取物均对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05) 结果见表1~2,且抑制率与浓度呈正相关,浓度为400 mg·ml-1时抑制作用最强烈,虽抑瘤率因提取方法的差异而有区别,但不显着。原因可能是由于提取方法的不同,各提取物有一点差异导致。
医学统计学论文        http://www.360qikan.com/