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印迹基因H19和Igf2在子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中的异常表达及其意义
目的 研究印迹基因H19和Igf2在子宫内膜异位症(内异症)患者子宫内膜的表达及临床意义. 方法 选择2011年1月至2012年8月至北京大学深圳医院生殖中心行试管助孕并已行宫腹腔镜检查的患者,其中证实为内异症的患者31例作为实验组,因男方因素不孕、女方因素完全正常的妇女33例作为对照组,收集分泌中期子宫内膜组织,采用实时定量聚合酶链反应方法(RT-PCR)测定两组子宫内膜组织H19和Igf2 mRNA表达水平. 结果 H19和Igf2 mRNA在内异症患者子宫内膜组织中的平均表达量分别为49.909±46.970和8.747±5.451,在对照组中的平均表达量分别为19.728士23.990和0.513土0.973,H19和Igf2在内异症患者与正常女性子宫内膜组织中的表达差异均具有统计学意义(P=0.006和0.00). 结论 印迹基因H19和Igf2可能与内异症性不孕有关.
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人先天性神经管畸形胎盘印迹基因甲基化状态的研究
目的:研究不同孕周神经管畸形(NTD)胎儿孕妇胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2基因启动子区的甲基化状态,分析其与NTD的关系.方法:应用MethyLight方法实时定量检测不同孕周28例NTD患儿孕母胎盘和28例正常对照乳母胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区的甲基化状态.结果:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在胎盘中普遍发生甲基化,而且在NTD患儿孕母胎盘中,H19,PEG10和IGF2中甲基化率略高于正常乳母胎盘组,但无统计学差异.将样品按照不同孕周分组后,IGF2基因启动子区甲基化水平在31～36周NTD胎儿乳母胎盘中显著高于正常胎儿乳母胎盘(P＜0.05).结论:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在所检测的NTD患儿孕妇的胎盘中总体甲基化水平与正常胎儿乳母胎盘无差异.但在妊娠31～ 36周时,NTD胎儿乳母胎盘中IGF2启动子甲基化水平显著高于正常胎儿乳母胎盘,提示印迹基因IGF2的甲基化状态可能与NTD的发生有关.
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SIRT6招募mRNA结合蛋白IMP1调控IGF2在293T细胞表达
目的 探讨SIRT6对肿瘤重要调节分子胰岛素样生长因子2(IGF2)的转录后调控机制.方法 在工具细胞系293T细胞中过表达SIRT6以及应用免疫共沉淀(IP)方法富集所有可能与SIRT6相互作用的蛋白,行质谱实验鉴定,并进一步通过IP/Western blot方法,检测SIRT6和IGF2 mRNA结合蛋白(IMP1)的相互作用,以及 SIRT6对IMP1的乙酰化/磷酸化修饰水平的影响.结果 质谱结果证明SIRT6和IMP1存在相互作用,并通过构建SIRT6和IMP1的过表达载体,进一步验证了SIRT6与IMP1的直接相互作用.检测乙酰化和磷酸化水平发现,SIRT6并未直接影响IMP1的乙酰化水平,而是促进其磷酸化修饰.结论 SIRT6可能通过促进对IMP1的磷酸化而起到在转录后水平抑制细胞中IGF2 mRNA的作用.
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印迹基因IGF2与p53在子宫颈鳞癌、子宫颈上皮内瘤变及子宫颈炎中的表达及意义
目的：探讨IGF2与p53在子宫颈鳞癌、子宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）及子宫颈炎中的表达及意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测IGF2与p53在45例子宫颈炎、126例CIN、47例子宫颈鳞癌组织中的表达，分析其与临床病理参数间的关系。结果子宫颈鳞癌组织中IGF2阳性表达显著高于CIN 及子宫颈炎（P<0.05）；p53阳性表达显著高于CIN 及子宫颈炎（P<0.0001）。子宫颈鳞癌组织中IGF2的阳性表达与浸润深度以及淋巴结转移呈负相关（P<0.05）。结论 IGF2、p53的异常表达与子宫颈鳞癌的发生密切相关。
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子痫前期重度脐血中IGF2的表达及与新生儿出生体重的关系
目的：探索IGF2在子痫前期重度脐血中表达及与新生儿出生体重的关系。方法：搜集子痫前期重度及对照组新生儿脐血IGF2水评及新生儿各项指标。结果：早发型子痫前期重度患者新生儿脐血IGF2的表达低于晚发型，晚发型低于晚发型对照组；子痫前期重度患者新生儿脐血中IGF2表达量与新生儿出生体重、胎盘质量、S/D呈相关。结论：IGF2的表达可能与子痫前期重度的发生发展相关。脐血IGF2水平可以作为新生儿生长发育的一种评估指标。
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乙肝相关性肝癌组织中IMP3与IGF2表达及与临床病理的相关性
目的：探讨乙肝相关性肝癌组织中胰岛素样生长因子2（ IGF2） mRNA 结合蛋白3（ IMP3）与 IGF2的表达及与临床病理的相关性。方法选择该院2013年1月至2014年12月收治的60例乙肝相关性肝癌患者，分别检测其肝癌组织及癌旁正常组织中IMP3及 IGF2的表达情况，并分析其与患者临床病理特征的相关性以及两种标志物之间的相关性。结果 IMP3及IGF2在肝癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织（ P＜0.05）；IMP3及IGF2的表达阳性率在低分化组织中、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、伴有门脉栓癌、有转移组织及 Edmondson-Steiner 分级Ⅲ～Ⅳ级中均明显增高；IMP2及IGF2在肝癌组织中的表达具有显著相关性（ r＝0.32，P＜0.05）。结论乙肝相关性肝癌患者的癌症组织中 IMP3和IGF2的表达均显著增强，同时IMP3及IGF2的表达具有显著相关性，通过对IMP3作用机制的探讨与研究，可将其作为临床癌症诊断和治疗的靶分子。
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IGF2基因组印迹系统人重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:构建携带IGF2印迹系统的腺病毒载体,并验证其在肿瘤细胞及正常细胞中的功效,为IGF2印迹在肿瘤靶向治疗中的应用提供理论基础.方法:将人源的IGF2印迹系统启动子H19、增强子enhancer及甲基化区域CTCF克隆至穿梭质粒pDC-312中构建IGF2基因印迹系统,从pDC-315-EGFP质粒中扩增出EGFP片段插入到构建好的IGF2印迹系统中,然后与腺病毒骨架Ad5通过脂质体Lipofectamine2000介导共转染HEK293细胞,包装成有感染能力的腺病毒Ad-H19-CTCF-enlmncer-EGFP,命名为Ad-EGFP;构建好的腺病毒分别感染IGF2基因印记保持的细胞MCF-7和GES-1及IGF2基因印迹丢失的细胞HRT-18,荧光显微镜下观察EGFP在三种细胞中表达的差异.结果:转染腺病毒载体的HEK293细胞表达EGFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,EGFP在HRT-18细胞中有大量表达,在MCF-7和GES-1细胞中不表达或仅有少量表达.结论:成功构建了携带IGF2基因印迹系统的腺病毒载体,证明其在IGF2基因印迹丢失的肿瘤细胞中特异性的表达,在正常细胞及IGF2基因印迹保持细胞中不表达,为IGF2基因印迹系统应用于肿瘤细胞的靶向治疗提供了理论基础.
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印迹基因Igf2对胎盘发育和胎儿生长的影响
基因组印迹是哺乳动物正常生长发育和行为的基础.印迹基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factorsⅡ,Igf2)对胎盘及胎儿的营养供应起着不可或缺的影响.它影响胎盘的大小、形态和营养转运功能,进而影响胎儿生长的营养供应.因此Igf2表达的变化对发育编程具有重要意义,对胎盘发育和胎儿生长起着重要的作用.
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p,p'-DDE致大鼠跨代雄性生殖毒性效应及Igf2 DMR2区域甲基化的可能机制
[目的]建立宫内p,p’-DDE暴露跨代大鼠模型,观察雄性子代生殖毒性是否具有亲源性遗传特征及可能的表观遗传机制.[方法] SPF级的SD大鼠于孕8～15天给予每天每千克体重100mgp,p,-DDE灌胃,另设溶剂对照组采用玉米油灌胃,孕鼠自由分娩,保留所有雄性仔鼠(F1代),同组别不同窝别的F1代仔鼠于出生后90天按雌雄比1:1交配,产生F2代仔鼠.染毒组和对照组雌雄F2代按以下分组设计两两交配后,产生F3代仔鼠,分组为:①雌雄均为对照组(C ♂-C♀),②雌雄均为染毒组(DDE ♂-DDE♀),③染毒组雄性与对照组雌性(DDE ♂-C♀),④对照组雄性与染毒组雌性(C ♂-DDE♀).用计算机辅助精子分析系统(CASA)分析3代雄性仔鼠成年后的精子质量,亚硫酸氢钠基因组测序法检测Igf2 DMR2区域甲基化水平,实时荧光定量PCR分析印记基因表达.[结果]p,p’-DDE可诱导F1、F2及F3代DDE♂-DDE♀、DDE♂-C♀精子数量和活力下降,F1代精子数量和活力分别从(70.63±11.79)×106/mL、(76.75±7.57)％下降至(50.00±13.08)×106/mL、(62.42±9.40)％;F2代精子数量和活力分别从(82.86±38.60)×106/mL、(82.14±6.44)％下降至(43.75±25.04)×106/mL、(60.88±25.03)％;F3代DDE ♂-DDE♀精子数量及活力分别从(68.89±41.37)×106/mL、(68.56±10.67)％下降至(21.66±4.83)×1&/mL和(29.33±32.70)％,F3代DDE♂-C♀精子数量和活力下降为(28.00±16.60)×106/mL和(34.60±31.60)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).F1～F3代雄性仔鼠精子细胞Igf2 DMR2区域(1、16、18位点)低甲基化,Igf2转录下调,H19转录上调,Igf2口基因的转录水平和Igf2 DMR2甲基化成正相关(r=0.8065).[结论] Igf2 DMR2区域甲基化改变可能在p,p’-DDE诱导的跨代雄性大鼠生殖毒性中起重要作用.
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IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达及与临床病理特征的关系
目的:研究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IMP3)与胰岛素样生长因子2(IGF2)在乙肝相关性肝癌中的表达,并探讨二者的相关性及与乙肝相关性肝癌临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学法,检测82例乙肝相关性肝癌组织及对应癌旁组织中IMP3及IGF2的表达;采用实时定量聚合酶链式反应法检测32例冰冻肝癌组织中IMP3及IGF2 mRNA含量;采用蛋白质印迹法检测4例IMP3强阳性染色及4例IMP3阴性染色对应的新鲜冰冻肝癌组织中IMP3及IGF2蛋白含量.结果:IMP3在62.2％肝癌组织中表达,在癌旁组织中不表达.IGF2在59.8％肝癌组织及14.6％癌旁组织中表达.同时,IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达密切相关(rn=0.335,P=0.002).另外,IMP3高表达与Edmondson-Steiner 3～4级(P=0.001)、TNM 3～4期(P=0.001)、α-甲胎蛋白(AFP)＞ 200 ng/ml (P=0.012)及伴有门脉癌栓的肿瘤(P=0.018)均密切相关;与IMP3表达相似,IGF2高表达亦与Edmondson-Steiner 3～4级(P=0.001)、TNM 3～4期(P＜ 0.001)及伴有门脉癌栓的肿瘤(P＜0.001)密切相关.结论:IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达密切相关,同时,IMP3与IGF2蛋白分子的检测有助于判断肿瘤恶性分化程度及进展.
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肝细胞癌组织中IMP3与IGF2表达对预后评估的临床病理学意义
目的 探讨癌基因胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 3,IMP3)和胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中表达的预后意义.方法 采用免疫组化SP法对92例HCC及其癌旁良性组织中IMP3及IGF2的表达进行检测,结合临床生物学指标及生存时间进行统计学分析.结果 HCC组织中IMP3和IGF2阳性率均明显高于癌旁组织(P均<0.01);IMP3表达与组织分化程度、是否转移、ACJJ分期、门脉癌栓及Ki-67表达均密切相关;IGF2的表达与肿瘤组织学分级和Ki-67蛋白表达相关(P均<0.05).IMP3与IGF2表达呈显著正相关(rs=0.265,P<0.05).生存分析显示,IMP3阳性表达的患者总生存期明显低于不表达的患者(Log-rank=16.854,P=0.000);IMP3和IGF2同时表达与二者单独表达的患者生存期差异有统计学意义(P=0.000和0.008).进一步分析证明IMP3是HCC生存期的独立影响因素(HR:0.473,95%CI:0.270～0.829,P=0.009).结论 联合检测HCC组织中IMP3和IGF2的表达对其诊断及预后有一定的价值,二者可能成为HCC生物标记中的新指标.
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血清维生素B12水平对产妇及新生儿IGF2DNA甲基化的影响
目的 评价健康产妇血清维生素B12水平对胎儿甲基化状态的影响.方法 对河南省侯寨乡中心卫生院80例临产产妇进行回顾性健康问卷调查;采用顺磁性颗粒化学发光免疫法测定血清维生素B12含量;realtime-PCR分析IGF2 P2、P3启动子区甲基化状态.结果 母亲与脐血血清维生素B12水平分别为167.68 pg/mL和205.98 pg/mL,两组之间差异具有统计学意义(P＜0.05).母血IGF2 P2甲基化率均值为3.03％,脐血3.84％,脐血IGF2 P2甲基化率高于母血IGF2P2甲基化率(P＜0.05).母血IGF2 P3甲基化率均值为5.58％,脐血为4.35％,母血IGF2 P3甲基化率高于脐血IGF2P3甲基化率(P＜0.05).脐血IGF2 P3的甲基化状态与母血IGF2P3的甲基化状态呈正相关(β=0.423,P=0.000 5),同时与母血维生素B12水平呈负相关(β=-0.211,P=0.006 9),与母亲受教育程度呈正相关(β=0.185,P=0.038).母血IGF2 P2的甲基化状态与母血维生素B12水平呈负相关(β=-0.213,P=0.016),与母亲被动吸烟(β=0.310,P=0.022)和孕期增重(β=0.362,P=0.019)呈正相关.结论 环境因素可影响母亲外周血及脐血DNA甲基化水平.
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H19/IGF2基因印记调控机制研究进展
H19/IGF2基因是目前发现的为数不多的印记基因之一,两基因定位相近,表达调控相关,对个体的生长、发育及行为发展有重要作用,H19/IGF2印记异常与许多肿瘤的发生有关.H19/IGF2基因印记调控机制非常复杂,近年的研究发现与其共同竞争一套增强子、等位基因的差异性甲基化、染色质构型以及转录周期有关,但尚未形成公认的统一调节机制.
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印迹基因IGF2和H19的研究进展
基因组印迹是一种依赖配子起源的某些等位基因修饰现象,参与此现象的基因称为印迹基因.IGF2和H1 9分别是父源表达和母源表达的印迹基因,它们发生印迹的机制甚为复杂.IGF2和H19广泛参与多种肿瘤的发生,发展和恶化.
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胰岛素样生长因子2(Igf2)研究进展
胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors Ⅱ,Igf2),又称生长调节素A,是一个单链多肽分子,与胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factors Ⅰ,Igf1)在氨基酸组成上具有同源性,并且二者都与胰岛素原(proinsulin)具有同源性[1].由于Igf2是一个在细胞增殖、分化、程序性细胞死亡和转化中具有重要作用的因子,对个体生长、发育具有重要作用,人类许多疾病的发生发展都与该基因的印迹调控异常有关.因此,近年来人们对Igf2进行广泛的研究,并取得了长足的进展.
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miR-100通过靶向IGF2调控非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭
目的 探讨miR-100对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制.方法 通过Real time PCR和Western blot检测miR-100和IGF2在人非小细胞肺癌细胞系中的表达;建立了稳定过表达成熟miR-100的非小细胞肺癌A549细胞系,通过细胞划痕实验和Boyden chamherr检测细胞迁移和侵袭能力的改变;在此基础上,通过报告基因分析和Western blot探讨miR-100引起非小细胞肺癌细胞生物学功能改变的作用机制.结果 Real time PCR结果表明miR-100在高转移潜能的非小细胞肺癌细胞A549中呈低表达,而IGF2在A549中呈高表达;在非小细胞肺癌细胞A549中过表达miR-100后降低了细胞的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因分析表明成熟的miR-100能够作用于IGF2的3'UTR区降低荧光素酶的活性,Western blot进一步证实了miR-100能够抑制内源性IGF2的表达.结论 MiR-100在高转移能力的非小细胞肺癌细胞A549中呈低表达,具有类似抑癌基因作用,并调控IGF2表达,降低了非小细胞肺癌细胞A549的迁移和侵袭能力,IGF2是miR-100的靶基因,有望成为肿瘤生物治疗的靶点.
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IMP3、IGF2在人脑胶质瘤中的表达及与预后的关系
目的 探讨胰岛素样生长因子IImRNA结合蛋白3(insulin-like growth factor-Ⅱ mRNA-binding pro?tein 3,IMP3)及胰岛素样生长因子-2(Insulin-like growth factor-2,IGF2)在胶质瘤中的表达及对临床预后的影响.方法 采用免疫组化S-P法检测171例脑胶质瘤组织及20例非瘤脑组织中IMP3、IGF2及Ki-67的表达情况;分析IMP3、IGF2及Ki-67表达强度间的相关性;Kaplan-Meier生存分析及多变量Cox比例风险回归模型分析胶质瘤患者生存状况的影响因素.结果 非瘤脑组织、胶质瘤组织中IMP3、IGF2和Ki-67的表达水平差异均有统计学意义( P均<0.05).且胶质瘤组织中IMP3、IGF2蛋白及Ki-67表达均随肿瘤病理级别升高而增高(P均<0.05).Spearman相关分析显示,IMP3、IGF2与Ki-67表达水平皆呈正相关,且IMP3蛋白的表达与IGF2蛋白的表达水平呈正相关(P均<0.05).Kaplan-Meier分析结果显示IMP3、IGF2的表达与临床预后密切相关(P<0.05).Cox比例风险回归模型分析示,肿瘤病理分级、IMP3、IGF2及Ki-67均为胶质瘤患者预后的独立危险因素(P均<0.05).结论 IMP3和IGF2蛋白的表达与胶质瘤的组织病理分级、肿瘤细胞增殖及患者临床预后密切相关,针对二者的靶点治疗有望成为胶质瘤的有效治疗方案.
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原位杂交检测IMP3、 IGF2在神经胶质瘤中的表达及其意义
目的:探讨胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)及胰岛素样生长因子-2(IGF2)在不同类型胶质瘤中的表达及意义.方法:采用免疫组化S-P法观察98例胶质瘤标本及20例非瘤脑组织中IMP3和IGF2蛋白的表达情况,分析二者的表达与不同临床病理特征的关系;并随机选取IMP3及IGF2不同程度阳性表达病例行IMP3和IGF2 mRNA原位杂交检测.结果:在不同类型胶质瘤组织中IMP3蛋白、IGF2蛋白及IMP3 mRNA均呈高表达,除少突胶质细胞瘤外,二者在Ⅲ级肿瘤组织中的表达水平均明显高于Ⅱ级(P＜ 0.05);在胶质母细胞瘤中二者的表达水平高.IGF2 mRNA在不同类胶质瘤中均有表达,但在Ⅱ级、Ⅲ级肿瘤组织及胶质母细胞瘤之间表达差异无统计学意义(P＞0.05).IMP3、IGF2蛋白的阳性表达水平与患者年龄、肿瘤病理级别及术后生存时间关系密切(P＜0.05).结论:IMP3和IGF2对胶质瘤的恶性进展、患者预后存在一定影响,两者可能成为脑胶质瘤诊断和治疗的特异靶点.
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Ox-LDL对VSMCs增殖及H19和IGF2表达的作用
目的 采用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)刺激脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),观察H19和胰岛素样生长因子2(IGF2)的表达改变,分析二者在VSMCs增殖中的可能作用.方法 将原代培养的脐静脉VSMCs分为对照组(未加Ox-LDL)、低浓度Ox-LDL(20 mg/L)组和高浓度Ox-LDL(50 mg/L)组.采用不同浓度的Ox-LDL分别刺激VSMCs 12和24 h后,用倒置显微镜观察VSMCs的生长状态;用MTT法检测VSMCs的细胞活力;用半定量RT-PCR法检测VSMCs H19和IGF2的mRNA表达水平.结果 各组Ox-LDL刺激VSMCs 12和24 h后,细胞数明显增加,以高浓度组较显著;低浓度Ox-LDL组VSMCs的细胞活力明显增加(P＜0.05),而高浓度Ox-LDL组VSMCs的细胞活力有所下降,在Ox-LDL刺激24 h时较为显著(P ＜0.05);Ox-LDL刺激脐静脉VSMCs后,随着刺激浓度的增加及时间的延长,H19mRNA表达增加(P＜0.01),而IGF2表达下降(P＜0.05).结论 Ox-LDL可诱导脐静脉VSMCs H19的mRNA表达增加,IGF2的表达下降,二者可能参与脐静脉VSMCs增殖的发生.
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星形细胞瘤中IGF2的表达及临床意义
目的 检测人脑星形细胞瘤及瘤旁组织中IGF2的表达,并研究其与患者临床特征关系.方法 收集贵州省人民医院病理科星形细胞瘤组织标本143例和90例星形细胞瘤旁组织,采用免疫组化S-P二步法检测IGF2的表达情况,并结合相关临床因素进行统计学分析.结果 IGF2在瘤旁组织中低表达,阳性率为13.3％(12/90);在星形细胞瘤低级别组和高级别组中均不同程度阳性表达,阳性率分别为46.8％(29/62),64.2％(52/81),且高级别组中表达与水平均显著高于低级别组(x2 =4.341,P＜0.05).结论 IGF2的表达星形细胞瘤病理级别及患者预后关系密切.IGF2的检测可能成为胶质瘤生物标记的新指标.
