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MiR-30d在稽留流产胎盘绒毛组织中表达的研究
目的 通过研究miR-30d在人稽留流产胎盘绒毛组织中的表达模式,探讨miR-30d与稽留流产的关系. 方法 收集2013年1月至2014年12月于石家庄第六医院治疗的稽留流产患者及同期该院1∶1匹配的正常人工流产孕妇为研究对象,分别为稽留流产组(80例)和对照组(80例);将稽留流产组按照年龄不同分为4个亚组:年龄≤25岁组(Y≤25)、26～30岁组(Y 26～30)、31～35岁组(Y 31～35)、≥36岁组(Y≥36).收集各组绒毛组织,利用qRT-PCR技术和原位杂交技术检测miR-30d在胎盘绒毛组织中的表达及定位. 结果 两组比较发现miR-30d在稽留流产组绒毛组织中的表达有上调趋势,但尚无显著性差异(P＞0.05).与对照组比较,miR-30d在Y≤25组患者胎盘绒毛组织中表达显著下调(P＜0.01),在Y26～30组患者胎盘绒毛组织中表达极显著降低(P＜0.01),在Y 31～35组患者胎盘绒毛组织中表达上调(P＜0.05),在Y≥36组患者胎盘绒毛组织中表达没有显著变化(P＞0.05).进一步分析发现在Y≤25组中,70％稽留流产患者胎盘绒毛组织中miR-30d表达显著下调(P＜0.01);在Y 26～30组,100％稽留流产患者胎盘绒毛组织中miR-30d表达显著下调(P＜0.01);而在Y 31～35组和Y≥36组,miR-30d的表达没有明显规律.原位杂交结果显示miR-30d表达主要定位于胎盘绒毛合体滋养层细胞. 结论 对于小于30岁的稽留流产患者,miR-30d在胎盘合体滋养层中表达下调,可能是引起稽留流产的原因之一.
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miR-30d反义核苷酸对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究miR-30d在结直肠癌组织中的表达情况,并分析miR-30d反义寡核酸(antisense oligonucleotide,ASO)对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:运用荧光定量PCR定量检测102例结直肠癌组织及对应癌旁组织中miR-30d的表达；通过miR-30d ASO降低结肠癌细胞中miR-30d的表达,利用MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞技术观察miR-30d ASO对结肠癌细胞产生的生物学效应.结果:在102例结直肠癌病例中,52.94％(54/102)的结直肠癌组织mi R-30d表达明显高于对癌旁组织(P＜0.05); miR-30d ASO可以显著降低miR-30d的表达(P＜0.05); MTT实验结果显示结肠癌细胞转染miR-30d ASO后,24、48和96 h的细胞存活数量均明显低于空白对照组和转染无义干扰组(P＜0.05)；克隆形成实验结果显示miR-30d ASO组克隆形成率比空白对照组和转染无义干扰组显著降低(P＜0.05)；流式细胞仪检测结果显示转染miR-30d ASO组较两个对照组细胞凋亡指数明显增加(P＜0.05)；另外,降低miR-30d的表达后发现Bcl-2 mRNA和蛋白均明显下降(P＜0.05).结论:miR-30d在结肠癌组织中表达上调,降低miR-30d的表达可有效抑制结肠癌细胞生长、促进细胞凋亡.miR-30d有可能成为结肠癌基因表达调控的新靶点.
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反义miR-30d对乳腺癌细胞侵袭迁移能力的影响
目的：分析miR-30d在乳腺癌组织中的表达情况，体外研究反义miR-30d寡核苷酸（miR-30d ASO）对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法运用荧光定量PCR检测108例乳腺癌组织及对应正常癌旁组织中miR-30d的表达；通过miR-30d ASO降低乳腺癌细胞中miR-30d的表达，采用Transwell实验和划痕实验观察miR-30d ASO对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响，运用Western blot方法检测侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白的表达变化。结果乳腺癌组织中miR-30d基因表达水平明显高于对应癌旁组织（P<0.05）；与空白对照组和无义干扰组相比，miR-30d ASO可以显著降低乳腺癌细胞miR-30d的表达（P<0.05）；Transwell实验和划痕实验结果显示转染miR-30d ASO后，乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力明显下降，同时MMP-2和MMP-9表达下降（P<0.05）。结论 miR-30d在乳腺癌组织中表达上调,降低miR-30d的表达可有效抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。miR-30d有可能成为乳腺癌侵袭转移调控的新靶点。
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非编码小RNA在肝癌发生中的作用及机制研究进展
MicroRNA(miRNA)是一类约22个核苷酸组成的小分子非编码RNA,主要在转录后水平通过促进靶基因mRNA的降解或抑制其翻译过程而发挥负调控作用.miRNA不但参与生命活动的一些基本过程,如细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和细胞代谢等,而且与人类疾病,尤其与恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为一类新的癌基因及抑癌基因,在癌症的发生发展中起重要作用.近年,我们首次在肝癌染色体变异区内发现新的肝癌转移促进因子miR-151并阐明了其分子作用机制,即RhoGDIA是miR-151下游靶基因,介导了miR-151的促肝癌转移功能；miR-151与其宿主基因FAK协同作用,活化Rac,cdc42及Rho GTPase,进而促进肝癌细胞的迁移、侵袭与转移,为阻断肝癌转移提供了新的治疗靶点.研究发现多个用于肝癌诊断及转移、复发、预后预测的miRNA分子标志物,建立了肝癌诊断、转移、复发及预后的miRNA预测模型；鉴定miR-125b为肝癌侯选抑癌基因,主要通过抑制癌基因LIN28B发挥抑癌作用；发现miR-30d为肝癌转移促进基因,转移抑制基因GNAI2为其功能靶基因；另外,发现miRNA不仅与mRNA的3’非翻译区结合,而且能与基因家族的蛋白编码区结合从而调控基因表达,为研究miRNA在肿瘤中的调控机制提供了新的思路；采用实验方法论证了单个基因能同时被多个miRNA所调控,为建立miRNA与mRNA复杂的相互作用调控网络提供了良好的实验基础.
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miR-30d在舌鳞状细胞癌组织中表达及反义miR-30d对细胞增殖、侵袭能力的影响
目的:探讨miR-30d在舌鳞状细胞癌组织中表达及反义miR-30d对细胞增殖、侵袭能力的影响.方法:选取2013年3月～2015年4月在我院行根治性手术治疗的TSCC患者68例,实时荧光定量PCR检测TSCC组织和癌旁正常组织中miR-30d基因表达,培养舌癌SCC-4细胞,分为ASO-miR-30d组、ASO-阴性对照组和空白对照组,检测各组细胞中miR-30d基因表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力.结果:TSCC组织中miR-30d相对表达量(1.89±0.21),显著高于癌旁正常组织的(1.31±0.16),差异有统计学意义(P＝0.000);TSCC组织中miR-30d相对表达量与TNM分期、分化程度和颈淋巴结转移有关(P＜0.05);与空白对照组和ASO-阴性对照组比较,ASO-miR-30d组细胞中miR-30d相对表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.05);MTT实验结果显示,与空白对照组和ASO-阴性对照组比较,ASO-miR-30d组24 h、48 h、72 h和96 h时细胞A值均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组和ASO-阴性对照组比较,ASO-miR-30d组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-30d在TSCC组织中呈高表达,反义miR-30d可有效减少TSCC细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力.
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MiR-30d表达变化与HER2阳性乳腺癌赫赛耐药相关性
目的 探索miR-30d表达变化与赫赛汀治疗乳腺癌耐药性的关系.检测miR-30d是否调控HER2阳性乳腺癌细胞对赫赛汀的耐药性,并初步证实该效应是否与miR-30d调控细胞自噬过程相关.方法 通过Q-PCR检测miRNA-30d在HER2阳性和HER2阴性乳腺癌组织以及乳腺癌细胞中的表达情况,向HER2高表达和HER2低表达的乳腺癌细胞中转染miR-30d mimics和miR-30d inhibitors,检测转染后细胞对赫赛汀的耐药性是否发生改变.通过Q-PCR检测miR-30d过表达和敲减后细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达水平变化.结果 HER2阳性乳腺癌组织和乳腺癌细胞中mir-30d表达显著下调(P<0.05);转染mir-30d能逆转HER2阳性乳腺癌细胞对赫赛汀的耐药性,同时下调细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达水平.结论 MiR-30d的表达下调与HER2阳性乳腺癌对赫赛汀的耐药性相关.miR-30可能通过调控自噬相关基因的表达,改变乳腺癌细胞对赫赛汀的耐药性.
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miR-30d通过抑制自噬影响喉癌细胞的增殖和耐药性
研究miR-30d抑制喉癌细胞株人喉癌表皮细胞(Hep-2)的发展和耐药性的作用机制.方法 收取手术后的患者样本,液氮法保存新鲜喉癌组织和正常喉组织,实时定量荧光PCR法检测喉癌组织和正常组织中miR-30d的表达量.在Hep-2细胞系中采用脂质体转染的方法转染miR-30d寡聚核苷酸、miR-NC无义序列以及BECN1质粒,生物信息学方法预测miR-30d潜在靶点,双荧光素酶报告基因法验证miR-30d的靶点,Westem blot技术检测蛋白表达量,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 喉癌组织组织与正常组织相比miR-30d表达量明显降低,并随着世界卫生组织规定(WHO)的临床分期级数增加而更加明显.转染miR-30d寡聚核苷酸序列后,miR-30d表达量较对照组明显上调,并且转染miR-30d后能明显抑制人喉癌细胞的增殖、自噬水平和耐药性.生物信息学预测发现BECN1是miR-30d的潜在靶点,并且双荧光素酶报告基因和Western blot进一步验证了BECN1是其靶点.此外,过表达BECN1能够逆转miR-30d对Hep-2增殖、自噬水平和耐药性的抑制作用.结论 在喉癌组织中miR30d量表达明显下调;miR-30d能够抑制喉癌细胞Hep-2的增殖、自噬水平和耐药性;BECN1是miR-30d的靶基因;过表达BECN1能逆转miR-30d对喉癌细胞的影响;miR-30d是潜在的人喉癌细胞早期诊断和基因治疗的候选靶点.
