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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响
目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响.方法:用重组BCG-EmⅡ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分离脾细胞,用ConA刺激培养16～18 h,然后用Annexin V-FITC染色法检测脾细胞凋亡.结果:小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组(P＜0.05或P＜0.01);每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组(P＜0.05或P＜0.01);鼻腔粘膜接种组脾细胞凋亡率显著低于皮下注射组(P＜0.01).结论:多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD4+T细胞亚群的数量,加强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应.
关键词： 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 脾细胞 凋亡 -
P物质对大鼠脾细胞免疫功能的影响
目的:研究P物质(SP)对脾细胞免疫功能的调节作用.方法:采用3H-TdR掺入法、放射免疫测定和流式细胞仪等方法,检测了SP对体外培养的大鼠脾细胞的增殖和分泌IL-2、IL-6、TNF功能及T细胞表型表达的影响.结果:SP能明显刺激脾细胞的增殖,其中浓度为1×10-4mmol/L时作用强;SP能促进T细胞CD分子的表达,使CD4+/CD8+升高;SP能显著促进脾细胞分泌IL-2,对脾细胞分泌IL-6具有抑制作用,而对分泌TNF无作用.结论:证实了SP是具有广泛的免疫调节作用的一种神经肽.
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抗淋巴细胞血清联合脾细胞促进异基因骨髓细胞形成嵌合体诱导免疫耐受
目的:探讨抗淋巴细胞血清(ALS)联合异基因脾细胞(SC)在促进异基因骨髓细胞移植诱导小鼠皮肤移植免疫耐受中的作用.方法:第-5～3天,C57BL/6(H-2b)受体小鼠每天腹腔注入0.5ml抗淋巴细胞血清(ALS),共3天.第0天,C57BL/6受体小鼠通过尾静脉输注均源自BALB/c(H-2d)的1×108脾细胞(SC)及2×107骨髓细胞(BMC).第二天,受体鼠腹腔注人200 mg/kg的环磷酰胺(CP).第六天进行从BALB/c到C57BL/6的尾-尾皮肤移植.每天观察移植皮片存活情况,共观察100天.并于骨髓细胞移植后30天、50天及70天对受体小鼠外周血进行嵌合体检查.结果:抗淋巴细胞血清和(或)异基因脾细胞的输注能促进异基因BMC的植入.并能延长移植皮片的存活时间.在30、50天及70天,SC+BMC+CP、ALS+BMC+CP及ALS+SC+BMC+CP移植组受体小鼠体内能检测到供体骨髓源性细胞,ALS+SC+BMC+CP移植组的嵌合率较高,随着时间推移,嵌合率下降,而且移植皮片存活时间与嵌合率具一定相关性.结论:抗淋巴细胞血清(ALS)联合异基因脾细胞能协助异基因BMC植入,形成嵌合体,促进免疫耐受的诱导,使移植皮片存活时间延长.
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雌二醇对活化脾细胞增殖的抑制作用及桑寄生的干预
目的:观察17β-雌二醇(E2)对脾细胞的影响,分析子宫内膜异位症雌激素-免疫的病理环节.方法:MTT法检测不同浓度雌二醇对静息脾细胞、ConA活化脾细胞增殖的影响、雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对E2作用的影响及桑寄生对E2的干预.结果:雌二醇对静息脾细胞增殖未见明显影响,10-6M E2明显抑制2.5μg/ml ConA活化的脾细胞增殖, Tamoxifen 可以抑制E2对ConA活化的脾细胞的增殖抑制作用,桑寄生也有相同的作用.结论:高浓度的雌二醇可以抑制脾细胞的增殖,此作用可以被雌激素受体拮抗剂拮抗,提示高浓度的E2可以抑制免疫细胞的活化,桑寄生拮抗E2抑制ConA活化的脾细胞增殖的作用.
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姜黄挥发油抗肿瘤作用机制研究
目的:探讨姜黄挥发油抗肿瘤作用.方法:运用体外培养细胞MTT法观察姜黄挥发油对肿瘤细胞的抑制作用及对BALB/C小鼠脾细胞增殖的影响.结果:姜黄挥发油能抑制人急性早幼粒白血病细胞株HL-60和肝胚细胞癌HepG2细胞株的增殖,并能促进BALB/C小鼠脾细胞的增殖.结论:姜黄挥发油对肿瘤有明显抑制作用,且能增强免疫功能.
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原头蚴及囊液促进小鼠脾细胞产生IL-22
目的 观察细粒棘球绦虫幼虫原头蚴及囊液对体外培养小鼠脾细胞产生IL-22的影响.方法 取Balb/c小鼠脾细胞,分别加入不同浓度原头蚴或囊液共培养48 h,检测上清液IL-22表达量及细胞IL-22 mRNA的相对表达量.同浓度原头蚴或囊液分别在0、12、24、36和48 h收集细胞,流式细胞术检测CD4+IL-22+T细胞比例变化.RPMI 1640培养基与脾细胞共培养设为对照组.结果 与对照组相比,ELISA和qRT-PCR检测显示在原头蚴为1 000/ml和囊液蛋白质量浓度为2.05 mg/ml时脾细胞产生IL-22增加;流式细胞术检测原头蚴组及囊液组CD4+IL-22+T细胞比例逐渐增加.结论 原头蚴及囊液均可促进小鼠脾细胞产生IL-22增加,提示IL-22可能参与宿主防御细粒棘球蚴感染.
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链球菌蛋白对5-氟尿嘧啶引起的小鼠脾细胞增殖抑制及凋亡的拮抗作用
目的 研究32080株链球菌蛋白体外对5-氟尿嘧啶(5-Fu)引起的小鼠脾细胞增殖抑制及凋亡的影响并探索其相关机制.方法 MTT法检测链球菌蛋白和5-Fu对小鼠脾细胞增殖活性的影响;流式细胞仪分析链球菌蛋白和5-Fu对脾细胞周期分布、凋亡率及线粒体膜电位等的影响.结果 不同浓度的链球菌蛋白(10～100μg/mL)能显著促进脾细胞增殖,并可拮抗5-FU所致的脾细胞增殖抑制作用;链球菌蛋白(50μg/mL)能明显促进5-FU阻滞的脾细胞通过S期,进入G2/M期,恢复细胞的有丝分裂进程;链球菌蛋白(50μg/mL)明显拮抗5-FU引起的脾细胞线粒体膜电位下降(P＜0.01),降低5-FU引起的脾细胞凋亡率(P＜0.01).结论 链球菌蛋白对小鼠脾细胞具有明显的增殖活化作用,拮抗5-FU对细胞的增殖抑制作用,促进5-FU抑制的脾细胞进入细胞分裂周期,稳定其线粒体膜电位,抑制细胞线粒体途径凋亡.
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门静脉输注供体脾细胞诱导异基因大鼠心脏移植耐受
目的通过门静脉输注同种异基因脾细胞、腹腔给予环磷酰胺诱导同种心脏移植耐受,并探讨其耐受机理.方法经门静脉给予受体大鼠3×108个异基因供体脾细胞,2 d后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺,10 d后实施心脏移植手术.观察、记录移植物的存活时间,通过MLR、DTH、IL 2逆转实验及过继性转移实验,探讨耐受机理.结果异基因心脏移植物的存活时间明显延长;MLR和DTH实验证明:受体大鼠的免疫应答受抑制,且该耐受表现为供体特异性;IL 2逆转实验、过继性转移实验表明:该耐受与克隆失活、抑制细胞和"感染”耐受机理有关.结论本诱导方案对于大鼠心脏移植存活时间的延长是一有效的方法,移植耐受的形成涉及多种机制.
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不同照射剂量建立非清髓性移植物抗宿主病模型小鼠外周血T细胞消长性研究
目的 探讨不同照射剂量建立非清髓性移植物抗宿主病(GVHD)模型小鼠外周血T细胞消长性变化,了解GVHD发病中T细胞的作用.方法 50只BALB/C小鼠随机分成5组(10只/组),包括对照组:不作任何处理;8Gy单纯照射(IRD)组:仅接受8Gy全身照射(TBI);7.5 GylRD组:仅接受7.5 GyTBI;8 GyGVHD组:接受8 GyTBI后＜24 h移植供鼠(10只C57BL/6)1×107个骨髓细胞和2.5×107个脾细胞;7.5 GyGVHD组:除接受7.5GyTBI,其他实验条件同8GyGVHD组.观察2个GVHD组小鼠移植后GVHD临床症状,肝、肺与肠病理变化,嵌合率以及T细胞亚群变化.结果 8与7.5 GyGVHD组小鼠移植后均为供鼠H-2Kb阳性细胞＞90％.10、17、24d的GVHD评分,8与7.5GyGVHD组分别为7.25±0.29+5.63±0.25(P＜0.01),5.00±0.41 vs4.00±0.41 (P＜0.05),6.50±0.41 vs8.00±0.41;GVHD评分组内两两比较,除8GyGVHD组10与24 d比较有较大变化(P＜0.05)外,其余变化更明显(P＜0.0l).CD4+/CD8+比值,8与7.5GyGVHD组分别为0.42±0.03 vs0.31±0.03,0.27±0.02 vs0.19±0.01,0.43±0.03vs0.32±0.03(P＜0.01);CD4+/CD8+比值组内两两比较,除10与24 d相近外,10较17 d和17较24d都变化明显(P＜0.01).CD4+ CD25+T比例,8与7.5 GyGVHD组分别为0.028 4±0.009 1 vs 0.020 9±0.004 9(P＞0.05),0.014 0±0.004 3 vs0.006 6±0.001 2(P＜0.05),0.009 4±0.000 8 vs0.005 1±0.000 7(P＜0.01);组内两两比较,均为17与24d相近,10较17 d和10较24d变化明显(P＜0.0l).结论 非清髓性移植物抗宿主病模型小鼠发病过程中CD4+T细胞起更重要的作用;随着小鼠移植后生存时间的延长,其体内的CD4+CD25+T细胞呈阶梯式下降,下降幅度与照射剂量呈负相关.
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脾细胞能够替代嵌合细胞并维持同种异体移植物耐受
Hayashi Y, Yamazaki S, Kanamoto A等人通过脾细胞对小鼠移植实验中骨髓派生嵌合体细胞的百分比和皮肤移植物存活率影响的分析得出,脾细胞能够产生与移植物MHC部分匹配细胞的嵌合状态,从而维持特异性免疫,延长移植物存活时间[Transplantation, 2007; 84(9):1168-1173].
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供者脾细胞和环磷酰胺联合预处理对移植心脏存活的作用
目的 诱导同种异体心脏移植的免疫耐受,为心脏移植的抗排斥反应治疗提供依据.方法 采用供者脾细胞和环磷酰胺联合预处理受者,诱导受者对移植心脏的免疫耐受,然后行大鼠颈部心脏移植术.将实验动物分成5组.对照组:受者不作任何预处理;组1:预处理第2天用环磷酰胺50～80mg/kg预处理受者;组2:预处理当天用供者5～10×107个脾细胞预处理受者;组3:受者不作任何预处理,手术当天开始用环孢菌素A 10mg/kg,每2天1次,共8～10次,腹腔内注入;组4:预处理当天用供者脾细胞5～10×107个和第2天环磷酰胺50～80mg/kg联合预处理受者.结果 各组移植心脏的存活时间明显不同,5组移植心脏的存活时间差异有显著性(P<0.01).供者脾细胞和环磷酰胺预处理受者的移植心脏存活时间明显延长.结论 供者脾细胞和环磷酰胺联合预处理,可诱导受者对移植心脏的免疫耐受.
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供者特异性抗原诱导免疫耐受的实验研究
目的比较不同特异性抗原和不同输注途径诱导免疫耐受的强度及探讨其可能机理。方法建立大鼠颈部异位心脏移植模型，采用供体特异性全血、供体特异性脾细胞和骨髓细胞（DSBM），通过外周、门静脉和胸腺三种不同途径输注以诱导免疫耐受的产生和维持。结果供体特异性抗原诱导免疫耐受以DSBM及通过胸腺接种途径效果佳。结论供者特异性抗原能诱导受体免疫耐受并促进移植物存活，可望成为较理想的临床免疫耐受诱导方法。
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十全大补汤总多糖成分的免疫抑瘤作用的研究
目的:研究十全大补汤总多糖抗肿瘤作用及对脾细胞功能的调节作用.方法:采用MTT法测定不同浓度的十全大补汤总多糖对体外培养的人鼻咽癌CNE1细胞增殖的抑制作用及对小鼠脾细胞增殖功能的影响.结果:200μg·ml-1十全大补汤总多糖在作用48h时对鼻咽癌CNE1细胞抑制率达47.1%.50μg·ml-1剂量组的十全大补汤总多糖在72h明显刺激小鼠脾细胞增殖.结论:十全大补汤总多糖可在体外抑制肿瘤生长,促进脾细胞的增殖.
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中药天南星醇提物抗肿瘤活性的研究
目的:研究中药天南星醇提物的抗肿瘤活性.方法:采用小鼠腋下接种肿瘤细胞法测定天南星醇提物的抗肿瘤活性;采用MTT法测定了天南星醇提物对小鼠脾细胞的增殖活性.结果:天南星醇提物对移植性肿瘤(肉瘤S180和肝癌H22)具有显著的抑制作用,而对小鼠脾细胞的增殖具有促进作用,并有较好的剂量依赖关系.结论:中药天南星有可能通过增强机体的免疫力来实现其抗肿瘤活性.
关键词： 天南星/药理学 抗肿瘤药(中药)/药理学 肉瘤180/药理学 脾细胞 免疫力 -
过氧化物酶体增殖剂PFOA对小鼠免疫系统的影响
目的: 研究过氧化物酶体增殖剂(PP)全氟辛酸(PFOA)对小鼠的免疫器官和免疫细胞、免疫功能的影响.方法: 喂养含PFOA的食物后, 观察C57B/6雄性小鼠胸腺和脾脏的重量及胸腺细胞和脾细胞数的变化.用碘化丙啶(PI)进行细胞DNA染色, 用小鼠单克隆抗体(mAb)进行细胞免疫荧光染色, 流式细胞术分析胸腺和脾细胞的细胞周期和细胞表型的变化.用蛋白A噬菌斑实验和ELISA法检测小鼠抗马红细胞的抗体生成B细胞和血清中IgM和IgG滴度的变化.用刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)分别刺激小鼠脾细胞, 用 3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖活性的变化.结果: 强效的PP(如PFOA)能导致小鼠胸腺和脾脏严重萎缩;其脾脏中T和B细胞数减少50%, 胸腺细胞数减少>90%, 以成熟的CD4+ CD8+细胞数的减少显著, S和G2/M期细胞数的下降明显.PFOA还可降低马红细胞诱导的IgM和IgG抗体生成B细胞的数量和血清中特异性IgM和IgG抗体的滴度, 以及T细胞活化剂ConA和B细胞活化剂LPS刺激的淋巴细胞增殖反应强度.停止喂养含PFOA的食物后, 上述指标迅速恢复正常.结论: 强效的PP能对小鼠免疫系统产生明显的抑制作用.
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系统性红斑狼疮小鼠脾细胞中 IL-12信号传递途径的研究
目的探讨在狼疮小鼠脾细胞中是否存在 IL-12通过 Lck/p38/c-jun传递信号及其对脾细胞的影响。方法以慢性移植物抗宿主病 (graft versus host disease, GVHD)小鼠为狼疮小鼠模型，分别采用放射自显影、 Western blot和 Northern blot，检测培养的脾细胞中 Lck的活性、 p38磷酸化活化及 c-jun基因表达的变化。结果狼疮小鼠脾细胞经 IL-12刺激后，与正常对照组相比较， Lck的活性增高、 p38异常活化， c-jun mRNA的水平增高。加入 Lck抑制剂 PP1组 Lck的活性及 p38磷酸化消失，无 c-jun基因的表达；加入 p38抑制剂 SB203580组亦无 p38磷酸化及 c-jun基因的表达。结论狼疮小鼠的脾细胞异常， IL-12可通过 Lck/ p38/c-jun在细胞内传递信号，直接参与免疫损伤。
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环孢素A对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响
目的:研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响.方法:小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3 mAb+抗CD28mAb及抗CD3 mAb+rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响.在单个细胞水平上,用流式细胞仪检测CsA对脾细胞表面CD25和CD69表达及IFN-γ产生的影响.结果:CsA对不同条件下诱导的小鼠脾细胞IFN-γ产生,均表现为剂量依赖性的抑制作用,其抑制机制与细胞的活化有关.结论:CsA可以剂量依赖的方式抑制小鼠脾细胞表达CD25、CD69及产生IFN-γ.
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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞凋亡的研究
目的:探讨以多房棘球绦虫(Em)重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠再以Em的续绦期幼虫泡球蚴的原头节攻击后,鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用Em原头节进行攻击感染.感染后18周杀鼠取脾分离脾细胞,用流式细胞术检测脾细胞的凋亡,同时设空载体、BCG和PBS对照组.结果:疫苗接种组小鼠脾细胞的凋亡率明显低于感染对照组;鼻腔内接种组脾细胞的凋亡率显著低于皮下注射组.结论:泡球蚴的感染可引起小鼠脾细胞发生凋亡,Em重组BCG-Em14-3-3疫苗接种可抑制感染小鼠脾细胞的凋亡.疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径.
关键词： 多房棘球绦虫 重组BCG-Em14-3-3疫苗 脾细胞 凋亡 -
章鱼糖蛋白对小鼠脾细胞的增殖作用
目的: 探讨从章鱼干中提取的2种糖蛋白粗品以及经分级纯化的4种糖蛋白对正常小鼠和免疫抑制小鼠脾细胞的增殖作用.方法: MTT比色法测定脾细胞的增殖.结果: 所有样品对正常小鼠脾细胞和免疫抑制小鼠脾细胞增殖均有促进作用, 对于免疫抑制小鼠脾细胞增殖作用更为显著, 与ConA合用部分级分在一定的剂量下有协同作用.结论: 章鱼干糖蛋白能促进小鼠脾细胞增殖.
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唐古特大黄多糖对小鼠脾细胞增殖的作用
多糖作为非特异性免疫调节剂, 在抗肿瘤、抗肝炎及抗衰老等方面具有明显作用, 受到广泛关注[1].大黄在我国药用已久, 是中医常用的药物之一.近年研究发现, 大黄除具有泻下作用外, 还有增强免疫功能、抗肿瘤等多种作用, 其机制与其多糖成分有关[2,3].我室从唐古特大黄中提取、分离得到水溶性多糖(Tanguficum Maxim polysaccharide, TMP), 进一步分离纯化得到TMP1和TMP2两种组份, 并比较了这两种多糖组份对小鼠脾细胞增殖反应的影响, 为进一步研究其活性奠定了基础.
