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羊胎盘肽对L6成肌细胞增殖能力和ATP浓度的影响
[目的]将羊胎盘肽粗品按照不同的分子量段进行划分,计算出不同分段的分子量分布,研究不同分子量段的羊胎盘肽对大鼠L6骨骼肌成肌细胞增殖能力和三磷酸腺苷(ATP(浓度的影响.[方法]采用凝胶过滤色谱法,将羊胎盘肽粗品进行分离,划分为不同的分子量段,以噻坐蓝(MTT)比色法检测不同分段羊胎盘肽对大鼠L6骨骼肌成肌细胞增殖的影响,并且采用增强型ATP检测试剂盒检测其对L6成肌细胞的ATP含量的影响.[结果]凝胶过滤色谱法分离羊胎盘肽划分为六段,其中F5、F6已不属于多肽或者氨基酸,故去除.MTT结果显示SPP(羊胎盘肽粗品)、F1、F2、F3均对大鼠L6骨骼肌成肌细胞增殖出现促进作用,其中羊胎盘中的组分F3促增殖作用为显著;F4则出现轻微抑制的作用.终确定除F3选用5μg/mL以外,其他各组均选用20μg/mL的加药浓度进行ATP浓度的检测.经过ATP实验,SPP和F3显著性促进骨骼肌成肌细胞的ATP浓度的升高(P<0.01),并且F3比SPP效果更好.而F1、F2和F4则促进ATP产生的作用并不显著.[结论]SPP以及其中的的F1、F2、F3、F4对于L6骨骼肌成肌细胞增殖能力的影响和ATP浓度的影响较为一致.其中,F3很可能是羊胎盘肽中的活性好的部分,即分子量在260～89Da的部分.
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天麻素对大鼠骨骼肌细胞化学损伤的保护
背景:现代药理学研究表明,天麻的主要成分天麻素可以恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平衡失调,产生镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用.目的:观察天麻素对L6大鼠成肌细胞化学损伤的保护作用.方法:用H2O2建立L6大鼠成肌细胞的化学损伤模型.DMEM培养液制备不同浓度的天麻素(1.562 500,0.781 250,0.390 625 g/L)预处理保护组的L6大鼠成肌细胞24 h,然后用0.1 mmol/L H2O2孵育80 min,同时设置增殖组(用不同浓度的天麻素预处理,但不经H2O2处理),模型组(仅用H2O2处理),阳性对照组(仅有L6细胞悬液),阴性对照组(只有DMEM培养液),对照组既不用天麻素预处理,也不用H2O2孵育.结果与结论:MTT检测显示,增殖组和保护组L6大鼠成肌细胞存活率明显高于模型组;DAPI荧光标记细胞核为蓝色,模型组细胞荧光度较弱,且数目显著少于保护组;苏木精-伊红染色显示保护组的细胞核形状较规则,细胞轮廓较清晰,而模型组破损细胞较多;Bax和Bcl-2免疫荧光细胞化学结果表明,模型组促凋亡基因bax表达明显高于保护组,而抑制凋亡基因bcl-2的表达量完全相反;流式细胞仪检测显示保护组的凋亡率显著低于模型组(P < 0.05).提示天麻素对保护大鼠骨骼肌细胞化学损伤有显著效果.
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miRNA-133a过表达对体外L6成肌细胞增殖分化作用机制的研究
目的 构建微小RNA-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MEF2A的影响.方法 构建表达含微小RNA-133a基因的重组慢病毒载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR(Taqman探针法)对微小RNA-133a基因表达水平进行检测;细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价微小RNA-133a过表达后对L6成肌细胞增殖的影响;倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖、分化的影响;Western blot法检测转录因子MEF2A表达水平的变化.结果 构建的微小RNA-133a重组慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;与对照组比较,转染L6成肌细胞24h后,微小RNA-133a基因的相对表达量明显增加(P＜0.01);L6细胞增殖数量明显增加(P＜0.01),对L6成肌细胞的分化有明显抑制作用(P＜0.01);MEF2A的表达量逐渐下降(P＜0.01).结论 成功构建微小RNA-133a重组慢病毒载体并转染16成肌细胞后可高效表达微小RNA-133a,促进体外成肌细胞的增殖并抑制分化.
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Bcl-2和PCNA表达在大鼠成肌细胞氧化应激损伤中的作用
目的:探讨Bcl-2、PCNA等蛋白表达在成肌细胞氧化应激损伤中的意义.方法:将对数生长期成肌细胞进行分组,结合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预处理2 h及过氧化氢处理,分为正常对照(control)组、单纯bFGF组、氧化应激组(H2O2组)和干预组(bFGF+H2O2组).免疫组化检测Bcl-2和Bax阳性沉积颗粒;免疫荧光观察成肌细胞形态及Bcl-2和Bax荧光表达;Western blot检测Bcl-2、PCNA等蛋白表达情况.结果:免疫荧光及免疫组化结果显示,与氧化应激组比较,干预组Bcl-2表达增加,Bax表达减少;Western blot显示,干预组Bcl-2和PCNA水平增加,Bax水平降低.结论:氧化应激诱导的大鼠成肌细胞损伤参与肌细胞病理进程.Bcl-2和PCNA表达上调可减轻成肌细胞损伤程度.
关键词： 深部组织损伤 氧化应激 L6成肌细胞 碱性成纤维细胞生长因子 -
活性氧促使L6成肌细胞的分化
目的探讨氧化应激对L6成肌细胞生长分化的影响.方法MTT法检测H2O2对L6细胞活力的影响;观察H2O2引起的细胞形态学变化,RT-PCR检测myogenin基因表达水平.结果在较短的处理时间内(1 h),低浓度的活性氧(50 μmol/LH2O2)有利于细胞的生长(P＜0.05);H2O2处理12 h后,50和150 μmol/L的H2O2能够诱导成肌细胞分化的标记分子-myogenin基因的表达,形态学研究结果表明H2O2能够诱导肌管的形成,促使成肌细胞的分化.结论活性氧可能是细胞内诱导细胞生长与分化的信号分子.
