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氯化消毒饮用水有机提取物对L-02肝细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响
目的 探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对人肝细胞株(L-02)细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响.方法 于2012年7-9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物.将L-02细胞分别于含0(对照)、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5L/ml氯化消毒饮用水有机提取物的培养基中暴露48 h.测定细胞中半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)与B细胞淋巴瘤2相关x基因(Bax) mRNA及蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,2.5、5L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中caspase-3、Bax的mRNA及蛋白表达水平均较高,而0.625、1.25、2.5、5L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中Bcl-2、PARP-1的mRNA及蛋白表达水平均较低(除0.625 L/ml组PARP-1蛋白外),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在本实验条件下,较高剂量的氯化消毒饮用水有机提取物暴露可上调L-02肝细胞中caspase-3与Bax基因,下调Bcl-2及PARP-1基因,促进细胞凋亡的发生.
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石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞生长曲线及周期的影响
背景:有报道指出石墨碳纳米颗粒具有强大的吸附能力,只要尽可能将其控制在有效浓度范围内,石墨碳纳米颗粒会具有很好的细胞相容性、增敏效应.目的:观察石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞的生长增殖、细胞周期及凋亡的影响.设计、时间及地点:细胞-材料学体外实验,于2007-01/2008-12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:石墨碳纳米颗粒由中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心自制.人肝细胞(L02)、人肝细胞(H17702)、小鼠细胞(3T3)、人肝癌细胞(HepG2)购自湘雅医院中心实验室公司.方法:取石墨碳纳米颗粒母液,稀释10倍后,采用激光粒度分析仪观察石墨碳纳米颗粒的大小及Zeta电位.取含胎牛血清的RPMI-1640培养基,设立11瓶,分别加入适量石墨碳纳米颗粒母液,使其含石墨碳纳米颗粒的浓度分别为100,75,50,25,20,15,12.5,10,7.5,5,0 mg/L.将L02细胞、H17702细胞、3T3细胞、HepG2细胞密度均调整为1×109L-1,接种后置37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度培养箱中,取处于指数生长期的细胞用于各项指标测定.主要观察指标:MTT比色法测定细胞数量,流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞凋亡率.结果:石墨碳纳米颗粒的粒径约20 nm,带有负电荷,其电位值为-14.8 mV.与未加石墨碳纳米颗粒的空白对照组比较,除人肝癌细胞(HepG2)外,不同浓度的石墨碳纳米颗粒对其余3株细胞增殖均有促进作用,且浓度为7.5 mg/L时促细胞增殖作用强.在石墨碳纳米颗粒浓度为7.5 mg/L.条件下,4株细胞的凋亡率均明显低于空白对照组.石墨碳纳米颗粒作用24 h的L02肝细胞周期发生改变,G0期细胞数减少,更多的细胞进入到S期和G2期.结论:石墨碳纳米颗粒能进入体外培养细胞内,并对细胞生长、增殖产生促进作用,不诱导细胞凋亡,其作用强度与浓度有关.
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紫七软肝片的兔含药血清对酒精致LO2细胞抑制的影响
目的:观察紫七软肝片对酒精致LO2细胞抑制的影响,探讨其防治肝纤维化的机制.方法:以紫七软肝片灌胃,制备兔含药血清,并以空白兔血清按1:8、1:4、1:2稀释作为低剂量组、中剂量组及高剂量组.以体外培养的LO2细胞株为研究对象,采用MTT法测定不同剂量组对酒精致LO2细胞抑制的影响.结果:经酒精作用后,LO2细胞抑制率显著增加,紫七软肝片中、高剂量组抑制率明显降低.结论:紫七软肝片可能通过促进细胞生长,减轻酒精对肝细胞的损伤,达到防治肝纤维化的目的.
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TGF-β1诱导人肝HL7702细胞发生上皮细胞间质转化的实验研究
目的:探讨体外培养的人肝细胞系在重组人转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下是否发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchyme transition,EMT)以及相关标志物的表达变化.方法:人类肝细胞HL7702在含20% 小牛血清的1640培养液培养2 d,改用无血清培养并TGF-β1分别诱导24 h,48 h,72 h;观察诱导前后细胞的形态学变化,实时荧光定量RT-PCR及蛋白质免疫印迹技术分析细胞中EMT相关基因和蛋白表达情况.结果:显微镜下观察到TGF-β1诱导前,肝细胞是不规则的六边形,诱导后细胞形态拉长变成纺锤形,细胞间隙变大;实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹显示上皮化标志物E-钙黏附蛋白在TGF-β1诱导后的细胞中表达显著下降,而间质化标志物N-钙黏附蛋白、波形蛋白和Twist却显著增加.结论:正常人类肝细胞株HL7702经重组人TGF-β1的诱导发生上皮间质转化,这为深入研究TGF-β1和肝纤维化之间的关系奠定了基础.
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β-catenin在L-02,WB,HepG2和SMCC-7721细胞中的表达及其意义
目的:探讨β - catenin的异常表达在原发性肝癌的发生、分化中的意义.方法:将4种细胞株进行贴壁培养传代.利用免疫细胞化学法检测β - catenin在人肝细胞株(L-02),人肝干细胞株(WB),肝癌细胞株( HepG2,SMCC-7721)中表达的特征.结果 在L-02细胞株中,β- catenin几乎全部分布于细胞膜,而细胞质和细胞核几乎无表达；在WB细胞株中,β- catenin主要分布于细胞膜,细胞质和细胞核有较少表达；在HepG2和SMCC-7721细胞株中,β- catenin几乎全部分布于细胞质和细胞核,并且有较高表达,在SMCC-7721中的表达多于HepG2细胞株.结论 β- catenin由细胞膜逐渐向细胞质和细胞核异位表达在原发性肝癌的发生、分化过程中可能具有重要作用.
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奥氮平通过ERK1/2通路诱导人肝细胞株中ICAM-1 mRNA的表达
目的 研究奥氮平对人肝细胞株HepG2中黏附分子ICAM-1表达的影响,探讨奥氮平诱导代谢综合征的作用机制.方法 使用奥氮平刺激hepg2细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测奥氮平对细胞中ICAM-1 mRNA表达的影响;Western blot法检测奥氮平对细胞中ERK1/2信号通路的影响.结果 奥氮乎(10 μmol/L)在给药4、8、12、24h后均可诱导ICAM-1 mRNA的表达,同时在3～30 μmol/L浓度范围内具有剂量依赖性,3、10和30 μmol/L剂量诱导的ICAM-1 mRNA表达量分别为对照组细胞的1.27±0.27、2.15±0.54和2.34±0.48倍;奥氮平在给药24h内可持续诱导Hepg2细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化,使用ERK1/2通路抑制剂U0126可明显抑制奥氮平诱导的ICAM-1的mRNA表达(P＜0.01).结论 奥氮平可通过ERK1/2通路诱导人肝细胞株中ICAM-1 mRNA的表达,这可能是该药诱导代谢综合征的作用机制.
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晚期糖基化终产物对人肝细胞株LO2增殖和凋亡的影响
目的:研究晚期糖基化终产物(AGEs)对人正常肝细胞株LO2的作用.方法:以体外培养的LO2细胞株为研究对象,采用MTT法测定不同质量浓度(0、3.75、7.5、15、30、60 g/L)AGEs对LO2生长的抑制作用,应用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,RT-PCR分析不同质量浓度AGEs处理LO2后其IL-1β,TNF-α,HMGB1的基因转录水平变化.结果:当LO2细胞在AGEs质量浓度分别为3.75、7.5、15、30、60 g/L保温48 h后,细胞的增殖均受到显著性抑制,且抑制作用具有剂量依赖性.流式细胞仪分析发现AGEs促使LO2发生凋亡,凋亡率亦随AGEs浓度增高而增加.RT-PCR方法检测显示,AGEs使LO2细胞中IL-1β,TNF-α,HMGB1的基因mRNA的表达水平增高.结论:AGEs可抑制人正常肝细胞株LO2的增殖和诱导其凋亡,并能上调IL-1β,TNF-α和HMGB1基因的表达.
