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通用模板信号扩增技术(UT-PCR)
PCR是常用的分子生物学诊断技术,但常用的PCR都存在种种不足,制约了其在临床的应用.通用模板信号扩增技术(UT-PCR)解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因/多位点同时检测两大难题.UT-PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低,并能实现高通量检测,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间.
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3种检测乙型肝炎病毒YMDD变异方法比较及结果分析
目的对检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的3种方法进行比较并分析结果.方法对101例用拉米夫定治疗的HBV感染者,测定其治疗前HBV DNA水平,定期随访,分别以通用模板信号扩增(UT-PCR)、限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和DNA测序法检测病毒YMDD变异.结果UT-PCR和PCR-RFLP的检测结果与DNA测序结果的符合率均为98.11%.按治疗前HBVDNA水平分为5×102～5×104拷贝/mL,5×104～5×106拷贝/mL,5×106～5×108拷贝/mL,＞5×108拷贝/mL 4个组,MDD变异率分别为10%,12.90%,32.43%和53.85%.YMDD突变后,HBVDNA水平显著降低,其中YVDD突变株的HBVDNA水平高于YIDD突变株(P＜0.01).结论UT-PCR法适合临床检测HBVYMDD变异.乙型肝炎患者用拉米夫定治疗时,病毒DNA水平越高,发生YMDD变异的几率越大.突变株的复制能力低于野生株,YVDD突变株复制能力强于YIDD突变株.
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乙型肝炎病毒YMDD变异不同检测方法比较与评价
目的 比较检测乙型肝炎病毒 (HBV) YMDD变异的3种不同方法,评价其在监测拉米夫定抗HBV治疗中发生耐药突变的价值.方法 对80例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者,测定其治疗前后血清HBV DNA含量、ALT水平变化,分别用聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫吸附法 (PCR-ELISA) 、通用模板信号扩增 (UT-PCR) 技术、以及基因测序3种方法进行HBV YMDD变异检测,并分析结果.结果 80例患者用基因测序法检测出34例发生YMDD变异,变异发生率为41.25%;用PCR-ELISA法检测出21例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率差异有显著性 (x~2=4.68,P<0.05) ,两者结果的符合率为61.76%;用UT-PCR法检测出33例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率无统计学差异 (x~2=0.03,P>0.05) ,两者结果的符合率为97.06%.结论 基因测序和UT-PCR方法检测HBV YMDD变异非常可靠,是监测拉米夫定耐药株的非常有效的方法,UT-PCR方法更适合临床应用,而PCR-ELISA方法需提高其敏感性.
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通用模板信号扩增技术
PCR是常用的分子生物学诊断技术,但目前常用的PCR都存在种种不足,制约了其在临床的应用.我们在Taqman荧光PCR的基础上开发了通用模板信号扩增技术(UT-PCR)比较好的解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因/多位点同时检测两大难题.UT-PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低,并能实现高通量检测,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间.
