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同位素标记相对和绝对定量蛋白组学技术筛选儿童哮喘不同病情控制水平血清差异蛋白
目的 从整体蛋白水平研究不同控制水平儿童哮喘患者血清的差异性蛋白,为防治儿童哮喘提供依据.方法 采用同位素标记相对和绝对定量标记结合二维液相色谱串联质谱定量蛋白组学技术筛选鉴定控制、部分控制和未控制儿童哮喘患者血清中差异表达蛋白,通过酶联免疫吸附测定法进行差异蛋白验证.结果 共鉴定蛋白260种,筛选出不同控制水平儿童哮喘间两两比较均有差异的蛋白57种(变化倍数＜0.8或变化倍数＞1.2),主要参与21种生物过程,主要具有8种分子功能类型,主要为17种细胞成分类型.酶联免疫吸附测定结果显示控制组的玻连蛋白含量(573.92±412.43)μg/ml高于未控制组的(382.27±238.64)μg/ml,差异有统计学意义(P =0.0399).结论 发现不同病情控制水平儿童哮喘患者血清中的差异性蛋白57种,这些差异蛋白可作为控制儿童哮喘的潜在生物学靶点.
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合并与不合并2型糖尿病的下肢动脉硬化闭塞症患者血清差异性蛋白组学分析
目的 通过蛋白组学研究,鉴定合并2型糖尿病的下肢动脉硬化闭塞症(DLASO)患者与不合并2型糖尿病下肢动脉硬化闭塞症(LASO)患者血清的差异性蛋白,为防治2型糖尿病患者发生LASO提供依据.方法 收集DLASO、LASO各15例患者的血清,对蛋白进行提取、定量和酶解,应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)结合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术,鉴定DLASO、LASO患者血清中的蛋白,筛选出DLASO患者与LASO患者的差异表达蛋白.利用PANTHER数据库对鉴定得到的差异性蛋白进行生物学过程、分子作用和细胞组分分析.结果 共鉴定出蛋白质338种,筛选出差异性蛋白27种,其中DLASO患者出现表达上调蛋白8种、表达下调蛋白19种.在生物学过程方面,差异性蛋白主要为参与细胞反应(48.1%)、代谢过程(48.1%)和生物黏附(29.6%)的蛋白;在分子作用方面,差异性蛋白主要为参与细胞结合作用(33.3%)、催化活性作用(29.6%)和结构分子活性作用(18.5%)的蛋白;在细胞组分方面,差异性蛋白主要为位于细胞区域(14.8%)、细胞器(14.8%)和细胞外区域(14.8%)的蛋白.结论 发现DLASO与LASO患者血清中的差异性蛋白27种,这些差异性蛋白可作为防治DLASO的潜在生物学靶点.
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人类肝癌细胞 HepG2、Bel-7402和 Li-7植入裸鼠体内后微量蛋白表达分析
目的：探讨HepG2、Bel-7402和Li-7不同肝癌细胞系在裸鼠体内生长过程中血清蛋白谱的表达情况，寻求与肝癌早期诊断相关的微量蛋白标志物。方法将40只 BALB／cA-nu 裸鼠随机均分为4组，分别为 HepG2、Li-7和 Bel-7402组以及对照组，对 HepG2、Bel-7402和 Li-7三种癌细胞分别进行培养和传代，制备浓度为1．5×107／mL 癌细胞悬液，在每组裸鼠皮下分别注射相应的癌细胞悬液0．2 mL，对照组注射 RPMI1640细胞培养基，观察裸鼠的生长情况，于注射后20、40和60 d 通过摘眼球法采集裸鼠血液样本，用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪（SELDI-TOF-MS）检测微量蛋白谱，采用 Ciphergen ProteinChip 3．0和 Ciphergen Biomaker Wizard 3．1软件和统计学分析软件 SPSS16．0对所得的数据进行分析，筛选出差异性蛋白。结果HepG2组将 HepG2细胞注射裸鼠后，在裸鼠血清中出现29个差异蛋白，规律变化明显的有8个，其中上调的有5个，下调的有3个。Li-7组将 Li-7细胞注射裸鼠后，出现12个差异表达蛋白，其中表达增强的有7个，表达减弱的有5个。Bel-7402组将 Bel-7402细胞注射裸鼠后，血清中出现5个差异蛋白，其中表达增强的有4个，表达减弱的有1个。结论不同类型的肝癌细胞在裸鼠体内生长过程中会产生不同的微量差异蛋白，这些蛋白经鉴定、检测开发有望成为临床不同细胞类型肝癌早期诊断的蛋白标志物。
