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稳定表达SirT7对其转染的P19细胞的增殖抑制作用
目的 构建稳定表达SirT7的P19细胞系并探讨Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶SirT7在该细胞中对细胞增殖和细胞周期的影响.方法 将SirT7的真核表达质粒转染进入P19细胞,并利用筛选标记筛选出稳定克隆,采用Western blot、流式细胞仪等方法观察SirT7对P19细胞生长和细胞周期的影响.结果 稳定表达Sirt7 P19 细胞系细胞生长速度减慢,流式细胞仪荧光分析呈现明显的G1/S期阻滞. 结论SirT7可导致P19细胞的周期阻滞,并抑制细胞的增殖.
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SIRT7在肿瘤发生发展中的研究进展
Sirtuins蛋白家族是一类高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的组蛋白去乙酰化酶.哺乳动物中的Sirtuins包括七种亚型:SIRT1-SIRT7,作为Sirtuins蛋白家族成员之一,SIRT7定位于核仁,是一种高度特异性的H3K18Ac(组蛋白H3的乙酰化赖氨酸残基18)去乙酰化酶.SIRT7的作用底物包括组蛋白和非组蛋白,底物的多样性决定着它参与体内多种细胞活动,如:细胞增殖、细胞新陈代谢、DNA损伤和应激反应等,并与肿瘤的发生发展密切相关.SIRT7在乳腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、结直肠癌和肝细胞癌等多种肿瘤中高表达;而在头颈部鳞癌和胰腺癌中的低表达又提示其可作为抑癌基因发挥作用.本文旨从SIRT7的基因组组成、作用底物及相关肿瘤作用机制等方面阐述SIRT7的研究进展,而其致癌或抑癌作用有可能使其成为肿瘤治疗的新靶点.
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SIRT7与肿瘤关系的研究进展
SIRT7是Sirtuins蛋白家族中成员之一,位于细胞核仁的蛋白.SIRT7主要参与细胞的rRNA转录、蛋白质合成、染色体重建、细胞生存、脂质代谢等重要生理过程.目前研究发现SIRT7在多种肿瘤组织中表达增多,与肿瘤的发生、发展密切相关.但SIRT7在肿瘤发生、发展过程中的作用机制及其与肿瘤的临床关系尚未明确.
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SIRT7生物学功能与人类疾病研究进展
SIRT7是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的第三类去乙酰化酶sirtuins家族成员之一.尽管SIRT7 是迄今sirtuins家族中研究少的成员,但是近的突破性研究使其去乙酰化活性及生物功能日渐清晰.SIRT7是sirtuins家族中唯一位于核仁的蛋白.在有丝分裂中,SIRT7介导rDNA转录激活.SIRT7通过其去乙酰化活性与P53、H3K18、PAF53、NPM1、GABP-β1和U3-55k等多种底物蛋白相互作用,参与调控细胞增殖、衰老、凋亡等多种细胞进程,并在应激条件下参与调节细胞生存与凋亡的平衡.SIRT7在细胞代谢过程中发挥重要作用,参与恶性肿瘤、心血管疾病、脂肪肝及糖尿病等疾病的病理性进展.本文总结了近年来SIRT 7的研究进展,就其生物学功能与人类疾病的相关性作一综述.
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S IRT7研究进展
SIRT7是Sirtuins蛋白家族（组蛋白去乙酰化酶类）成员之一，位于17号亚染色体（17q25．3）的单拷贝基因。以往研究多集中在SIRT1～SIRT6，近年来，随着对SIRT7研究的不断深入，发现其对特定底物具有脱乙酰化物酶的活性，可通过多种途径参与基因转录、蛋白质合成、染色体重构及细胞应激等过程的调节。此外， SIRT7还参与相关疾病及衰老的发生发展过程。本文就近年来SIRT7研究进展作一综述。
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SIRT7基因乙酰化活性缺失突变真核表达载体的构建
目的：构建SIRT7基因乙酰化活性缺失的定点突变真核表达载体。方法用RT‐PCR法从293T细胞中扩增SIRT7基因，并克隆到真核载体 pcDNA 31．／myc‐His（－）A上。采用 Two‐step PCR定点突变技术，构建SIRT7基因的 H187Y突变质粒，经测序确证定点突变成功，再将SIRT7及突变载体转染293T细胞，Western blot检测融合蛋白表达。结果克隆出SIRT7基因，构建了真核载体pcDNA 31．／myc‐His‐SIRT7，经 Two‐step PCR获得突变体pcDNA 31．／myc‐His‐SIRT7H187Y。DNA测序结果表明，编码187位氨基酸的560～562位碱基由CAC突变为TAC ，其他碱基均无突变。SIRT7和 H187Y突变载体转染293T 细胞后，可检测出myc‐SIRT7融合蛋白表达。结论成功构建了SIRT7以及 H187Y突变的真核表达载体。
关键词： SirT7 Two-step PCR 定点突变 真核表达载体 -
能量限制和高能量培养对HepG2细胞SIRT7表达的影响
目的 观察能量限制(CR)、高能量[包括高糖(HG)、高脂(HP)]培养基对HepG2细胞SIRT7表达的影响,为进一步研究SIRT7的功能及其在相关代谢疾病中的作用机制提供线索.方法 采用RT-PCR、Western blotting等方法检测在不同培养条件下HepG2细胞SIRT7的表达水平.结果 与HG[mRNA:(0.3001±0.09661)、蛋白质:(0.2435±0.01240)]培养基相比,CR和HP均上调HepG2细胞SIRT7的mRNA转录水平[(0.4185±0.07617)、(0.4443±0.04717)]和蛋白质表达水平[(0.3300±0.04769)、(0.7834±0.045937)],差异有统计学意义(P＜0.05)；且CR与HP相比,后者中SIRT7 mRNA转录水平和蛋白质表达水平更高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SIRT7可能参与肝糖和脂代谢调节,影响脂肪肝的形成.
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Sirt7在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义
目的:作为七个Sirtuin(SIRT,又称抗衰老酶)家族成员(Sirt1-Sirt7)之一,Sirt7已被发现在很多肿瘤中异常表达,但其在宫颈癌中的表达仍不清楚.本研究中重点探索Sirt7在宫颈鳞状细胞癌中的表达以及其在宫颈癌发生、发展及转移方面的临床意义.方法:本研究共纳入手术切除宫颈癌组织石蜡标本113例,采用免疫组化(SP)法检测宫颈癌标本39例,宫颈上皮内瘤变标本62例和正常宫颈组织12 例中Sirt7的表达情况,并分析Sirt7与宫颈癌临床病理之间的关系.结果:Sirt7在正常宫颈、宫颈鳞状上皮内瘤变(低度)、宫颈鳞状上皮内瘤变(高度)及宫颈鳞癌组织中的阳性表达率依次上升,分别为 8.3%,13.1%,41.7% 及69.2%(P<0.05).另外,Sirt7的表达情况与宫颈鳞癌的组织分化程度相关(P<0.05),具有统计学意义,而与临床分期、淋巴结转移及患者年龄无关(P>0.05).结论:Sirt7可能在宫颈鳞癌的恶性进展中发挥作用,有可能是宫颈鳞癌治疗的一个潜在靶点.
