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洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性
目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制.方法 MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,vCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用.结果 Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30unol·L-1Lom使K562/ADM对A1DM的IC50值由79.03 μmol·-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L.Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响.结论 Lon通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性.
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MDR1基因多态性对口服环孢素A药代动力学的影响
目的非线性混合效应模型(NONMEM)考察中国健康人多药耐药基因(MDR1)中26外显子的C3435T多态性与环孢素A(CsA)药代动力学特性间的关系.方法HPLC法测定20名健康男性单次口服CsA微乳溶液制剂500 mg后24 h内不同时间点的药物浓度.MDR1的基因多态性测定采用DNA限制性片段长度多态性法,并用基因测序法验证.数据处理与模型拟合采用NONMEM法.结果中国健康人中含MDR1 C3435T CC或CT型的相对生物利用度较TT型高40%.结论MDR1中C3435T多态性是个体间CsA相对生物利用度差异的影响因素.
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Bullatacin克服肿瘤多药抗药性作用及其机理
目的:探讨bullatacin克服肿瘤多药抗药性(MDR)的作用及其机制.方法:以两对MDR细胞株及其相应的敏感株进行对比,比较两种细胞株的细胞毒、Fura-2及阿霉素细胞内积累.结果:bullatacin不仅对敏感细胞株具有很强的细胞毒活性,而且对MDR细胞株也同样具有很强的细胞毒活性,不受抗药性的影响.bullatacin能使MDR细胞内Fura-2的积累增加;也能增加MDR细胞内阿霉素的积累.结论:bullatacin具有克服MDR的作用,其作用机理与bullatacin影响MDR细胞P-gp的功能,使MDR细胞内抗癌药物积累增加有关.
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环孢素A对银杏内酯B大鼠体内药动学的影响
研究环孢素A(cyclosporine A,CyA)对大鼠静脉注射中药成分银杏内酯B(ginkgolide B,GB)药动学的影响,并进行作用机制研究.实验建立了测定大鼠血浆、脑组织和尿液中GB浓度的LC-MS方法,研究了CyA对GB在大鼠体内血药浓度、脑分布和肾排泄的影响.结果表明静脉注射CyA(10及20 mg·kg-1)可以显著增加GB的AUC0-360min(P<0.01),降低其CL(P<0.001);静脉注射CYP3A抑制剂伊曲康唑(itraconazole,ICZ)则对GB的药动学行为无影响.脑分布结果显示,高、中、低剂量的CyA均可增加GB在脑中的浓度,此作用具有浓度和时间依赖性,在5 min时不同剂量的CyA均可显著增加GB在脑中的分布(P<0.001),但在20及60 min时仅高剂量CyA组可显著增加GB脑中的浓度(P<0.01及P<0.001).不同P-gp抑制剂均可减少GB的肾排泄,其中CyA(20 mg·kg-1)组、维拉帕米(verapamil,WR)组及地高辛(digoxin,DGX)组GB 8 h累积排泄百分率仅分别为对照组的34.8%(P<0.001)、59.4%(P<0.001)及79.7%(P<0.05);而ICZ组则无此作用.大鼠静脉给予P-gp抑制剂CyA可以显著提高GB的血药浓度,减少肾脏对GB排泄且能增加GB在脑中的分布.
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番荔枝内酯单体89-2实验治疗KBv200及KB细胞移植瘤的作用
目的番荔枝内酯单体89-2是自阿蒂莫耶番荔枝植物分离获得.本研究旨在探讨89-2对MDR肿瘤的实验治疗作用.方法以MTT法测定细胞毒;KBv200及KB细胞裸鼠移植瘤模型研究89-2对MDR肿瘤的实验治疗作用;以Fura-2-AM法测定P-糖蛋白(P-gp)功能.结果 89-2对KBv200及KB细胞的IC50分别为48.7和64.6 nmol*L-1(P>0.05).89-2对KB及KBv200细胞裸鼠移植瘤具有相似的剂量依赖性抑制作用,而毒性可以耐受.89-2剂量依赖性地增加KBv200细胞的Fura-2积累.结论 89-2体内外均抑制KB和KBv200细胞生长,具有开发前景.
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9-硝基喜树碱在Caco-2细胞模型中的体外摄取、转运及外排动力学
目的研究9-硝基喜树碱(9-NC)的细胞摄取、转运及外排特性.方法一种体外培养的人小肠上皮细胞模型Caco-2应用于9-NC的小肠上皮细胞的摄取、跨膜转运及外排动力学研究.评价了时间、温度、pH,P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂对细胞摄取的影响.采用HPLC测定药物含量.结果9-硝基喜树碱以被动扩散为主要方式被细胞摄取和转运.药物的摄取与时间呈正相关,与温度、pH呈负相关.P-gp抑制剂环孢菌素和维拉帕米增加9-NC细胞摄取(P＜0.05).药物从Basolateral(B,基底面)到Apical(A,肠腔面)的渗透系数Papp大于A到B(2.6-6.9倍).9-NC外排符合二级外排动力学过程,A侧m0[(148.0±2.2)pmol·cm-2]和外排速率(41.1 pmol·cm2·min-1)高于B侧的m0[(121±7)pmol·cm-2(P＜0.05)和外排速率(29.2 pmol·cm2·min-1)(P＜0.01).结论9-NC是以被动扩散方式为主要方式被小肠上皮细胞摄取和转运,并受到P-糖蛋白强烈的外排作用.
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抗P-糖蛋白多肽模拟物的设计、合成与活性评价
目的设计、合成抗P-糖蛋白抗体(PHMA02)的多肽模拟物,测定其与P-gp结合活性.方法模建出PHMA02的互补决定簇(complementarity-determining region, CDR)三维结构,构建出抗P-gp的多肽模拟物.流式细胞仪测定其活性.结果该模拟物竞争P-gp抗体与P-gp结合,并部分阻断P-gp药物外排泵的功能.结果显示抗P-gp肽模拟物对P-gp具有相同结合活性.结论根据抗体CDR区的构象特征可以构建具有生物活性的肽模拟物.基于抗体结构的药物设计将推动药物研究的发展.
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阿立哌唑在Caco-2细胞单层模型中的跨膜转运
本文研究了阿立哌唑(aripiprazole)在Caco-2细胞模型中的跨膜转运特征.一种体外培养的人小肠上皮细胞模型--Caco-2细胞模型应用于阿立哌唑的跨膜转运研究.评价了时间、供给液浓度、pH值、温度及P-糖蛋白抑制剂对阿立哌唑跨膜转运的影响.采用高效液相色谱法检测药物浓度.结果表明阿立哌唑主要通过被动扩散的机制转运,同时兼有载体介导转运.阿立哌唑的转运量与时间、pH值、温度成正相关.表观渗透系数Papp值随供给液浓度升高而增大,10μg·mL-1时趋向饱和,之后随阿立哌唑浓度的增加而逐渐减小.P-糖蛋白抑制剂环孢菌素-A显著增加阿立哌唑的跨膜转运.
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MDCK-MDR1细胞模型及其在药物透过研究中的应用进展
本文介绍了MDCK-MDR1细胞系的特点、模型的建立,药物在其细胞模型上吸收转运的研究进展.概述了国内外关于利用MDCK-MDR1细胞系作为模型进行药物筛选、药物相互作用和研究药物吸收转运机制等方面的内容.MDCK-MDR1细胞系高表达P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),且P-gp呈极性分布,因而它可以作为药物转运模型快速筛选P-gp底物和抑制剂,以及肠道、血脑屏障、肾脏的体外模型.
关键词： MDCK-MDR1细胞 P-糖蛋白 药物转运 细胞模型 -
外排型转运体与CYP450酶所介导的药物相互作用
多种药物同时给药后药物间相互作用能引发许多不良反应和治疗上的困难.引起这种药物相互作用的主要因素包括药物外排型转运体:P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)以及乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)3种ABC转运体以及药物代谢酶细胞色素P450 (CYP450).近年来,大量研究发现决定口服药物生物利用度的主要因素是肠道细胞中CYP3A对已吸收药物的生物转化作用和肠道细胞中P-gp对己吸收药物的主动外排作用.同为CYP3A和(或)P-gp底物的药物,当其与CYP3A和(或)P-gP的抑制剂同时服用后,药物的口服生物利用度可能升高.MRP、BCRP与P-gp同属药物的外排泵,与P-gp有重叠的底物特异性.MRP及BCRP与代谢酶CYP3A之间也存在着相似于P-gp的药物相互作用.本文从外排型转运体的类型、参与药物代谢的主要CYP450酶家族CYP3A、临床上由外排型转运体及代谢酶共同介导的药物相互作用和体外研究方法等方面进行综述.
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肠道P-糖蛋白辅料抑制剂的研究进展
位于小肠上皮细胞顶端的P-糖蛋白(P-gp)是一种能量依赖性外排泵,可降低多种底物药物的生物利用度.抑制肠道P-gp以增加药物生物利用度受到越来越多的关注.本文将肠道P-gp辅料抑制剂分为非离子型表面活性剂、聚乙二醇类、β-环糊精衍生物和壳聚糖硫醇盐,并对其作用机制进行综述.与传统P-gp抑制剂相比,辅料抑制剂的非特异性药理作用极小,因此几乎不产生副作用.辅料抑制剂有望代替传统P-gp抑制剂,广泛用于增加难溶性及低口服吸收药物的肠道吸收,从而增加该类药物的生物利用度.这些辅料抑制P-gp的机制及其临床应用还需更多研究和探讨.
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P-糖蛋白在药物代谢动力学中的作用及其临床意义
1970年Biedler与Riehm在小鼠白血病细胞P388及中国仓鼠肺细胞中首先发现多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象.1976年Juliano与Ling发现在耐药的中国仓鼠卵巢细胞表面上能表达一种磷糖蛋白(phosphoglycoprotein)即P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)[1].
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他莫昔芬药物基因组学研究进展
他莫昔芬(tamoxifen,TAM)作为常用的非甾体类抗雌激素药物,广泛用于雌激素受体/孕激素受体阳性的乳腺癌患者的辅助治疗.TAM主要通过肝脏的细胞色素P450酶代谢为活性产物4-羟基他莫昔芬(4-OH-TAM)和N-去甲基-4-羟基-他莫昔芬(EDF),从而发挥药理作用.4-OH-TAM和EDF与受体结合的能力比TAM高30至100倍,从而能够有效的抑制雌激素受体依赖的乳腺癌细胞的细胞周期.CYP3A4和CYP2D6作为TAM主要代谢酶参与其代谢形成活性代谢物,这两种细胞色素酶都具有等位基因多的特点.CYP3A4和CYP2D6的基因多态性会影响TAM在患者体内的活性代谢物的血药浓度,从而可能会影响其治疗效果.参与TAM体内过程的主要转运体的基因多态性也会影响TAM在患者体内的血药浓度,进而影响接受TAM治疗的乳腺癌患者的临床预后效果.本文总结了TAM体内过程相关的代谢酶及转运体等的基因多态性与TAM活性代谢物浓度/疗效/不良反应的相关性,为进一步的药物基因组学研究以及临床合理用药提供参考.
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P-糖蛋白的表达和功能活性调控研究进展
积极外排异物是细胞适应外界环境的主要机制,由此产生的多药耐药是肿瘤化疗失败的首要原因.由MDR1基因编码的P-糖蛋白的高表达导致药物外排增加是MDR发生的主要机制.近研究发现,转录因子(transcription factor)、DNA甲基化、组蛋白乙酰化程度以及磷酸化、糖基化、泛素化和MDR1基因多态性在P-糖蛋白调控过程中起重要作用,有望成为提高肿瘤化疗效果的治疗新靶点,本文将近年来相关研究进展作一综述.
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泊洛沙姆在药物穿越血脑屏障中的重要作用
泊洛沙姆是一种具有药理活性的多功能药用辅料,在药剂学中应用广泛.近年来,研究发现泊洛沙姆可以通过多种作用机制帮助药物穿越血脑屏障,抑制血脑屏障上的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白等外排泵系统;吸附血浆中的不同载脂蛋白后,通过与血脑屏障上相应受体的结合,使泊洛沙姆包被的纳米粒主动转运入脑;连接各种配体及单克隆抗体等导向性分子,使其通过受体介导的转运进入脑部.本文综述了泊洛沙姆在促进药物穿越血脑屏障的重要作用,对设计脑靶向药物传递系统具有重要意义.
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基于TPGS的纳米递药系统在逆转P-糖蛋白介导肿瘤多药耐药中的应用
肿瘤多药耐药性(multidrug resistance,MDR)严重影响了化疗药物的临床疗效.P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过度表达则是引发肿瘤MDR的主要原因之一,P-gp抑制剂的应用可以达到逆转肿瘤MDR的效果,是一种增强化疗药物抗肿瘤作用的有效手段.近年来,由于聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(D-α-tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS)安全无毒,抑制P-gp效果出色,其在纳米递药系统的应用得到广泛研究.本文对P-gp及其抑制剂研究、TPGS及其抑制P-gp机制研究和TPGS在纳米载药系统中逆转肿瘤MDR应用进行综述.
关键词： 肿瘤 多药耐药性 P-糖蛋白 聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯 纳米载药系统 -
SORCIN与肿瘤耐药及耐药相关转运体研究进展
可溶性耐药相关钙结合蛋白(soluble resistance-related calcium-binding protein,SORCIN)是一个22kDa的具有典型“EF-hand”结构的钙结合蛋白,参与细胞内钙稳态调节.SORCIN广泛分布于多种组织,其中在正常的心脏与脑组织中高表达,而在部分肿瘤组织中过表达.近年来,大量的临床数据显示SORCIN与肿瘤耐药性密切相关.基础研究表明SORCIN不仅参与肿瘤细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的形成,且与肿瘤的恶性程度、不良预后密切相关.此外,部分研究证明SORCIN参与ATP结合盒转运体(ABC transporter)的调节,进而对肿瘤耐药性产生影响.因此,SORCIN有望成为肿瘤耐药诊断及治疗的新靶点.本文对SORCIN及其在肿瘤耐药方面的研究进展进行综述.
关键词： 可溶性耐药相关钙结合蛋白 多药耐药 ATP结合盒转运体 P-糖蛋白 钙稳态 -
新型紫杉烷化合物NPB304及其协同维拉帕米逆转耐药的研究
研究新型紫杉烷类化合物NPB304逆转肿瘤多药耐药的作用.MTT法测定化疗药物的IC50,Westernblotting方法分析P-糖蛋白(P-gp)的表达,分别通过罗丹明123 (Rh123)蓄积实验和分析试剂盒测定化合物对P-gp功能及P-gp ATPase活性的影响,采用分子对接预测化合物与P-gp结合能力的强弱,用MDCK Ⅱ和MDRl-MDCKⅡ细胞模型分析NPB304的跨膜转运.在KBV细胞中,NPB304具有多药耐药逆转作用;在MCF-7/paclitaxel细胞中,NPB304协同P-gp抑制剂维拉帕米增强逆转耐药的活性,10μmol·L-1维拉帕米与paclitaxel合用时逆转倍数为56.5倍,合用NPB304增加耐药逆转倍数;NPB304与维拉帕米合用时协同增加Rh123在耐药细胞中的蓄积,NPB304 (0～1 μmol·L-1)增强维拉帕米激活P-gp ATPase活性的作用;NPB304与P-gp的TM区存在疏水相互作用,与TM区A链的结合力较强;NPB304在较低浓度(0～1.5 μmol·L-1)时激活P-gp ATPase,发挥抑制P-gp功能的作用,但不具有明显的P-gp底物特征.NPB304通过抑制P-gp的功能活性发挥自身及协同维拉帕米逆转耐药的作用.
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雷公藤甲素对鼻咽癌细胞P-gp表达与功能的影响
探讨雷公藤甲素对鼻咽癌HNE1细胞P-gp蛋白表达与功能的影响.MTT法测定HNE1细胞的存活率;流式细胞仪测定多柔比星在细胞内的蓄积水平及P-gp对其底物分子罗丹明123 (Rhodamine123,Rh)的外排作用;Western blot测定HNE1细胞P-gp表达水平;ATP试剂盒测定细胞内ATP水平;JC-1染色法测定细胞线粒体膜电位的变化.结果显示,雷公藤甲素、多柔比星均可抑制鼻咽癌细胞HNE1的增殖,二者合用能显著增加抑制率;雷公藤甲素显著增加HNE1细胞内多柔比星的浓度,抑制对Rh外排作用(P＜0.05或P＜0.01),下调细胞P-gp表达;雷公藤甲素可显著降低细胞内ATP的水平(P＜0.05);JC-1染色显示雷公藤甲素可降低细胞线粒体膜电位.提示雷公藤甲素能抑制P-gp表达及功能,增加肿瘤细胞内药物浓度,增强化疗药物的细胞毒性作用.
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基于RNA干扰技术的外排转运体体外模型及评价
为建立多药耐药相关蛋白2 (MRP2)和P-糖蛋白(P-gp)的体外RNA干扰模型,应用化学合成的siRNA转染HepG2细胞,并用实时PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达变化,应用MRP2和P-gp底物罗丹明和甲氨蝶呤进行功能评价确定模型是否成功.siRNA筛选结果显示,MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2能够显著地抑制MRP2或P-gp的mRNA表达,抑制率分别为68％和84％;MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够明显地抑制MRP2或P-gp的蛋白表达,抑制率分别为62％和70％,同时不影响其他转运蛋白的表达;给予MRP2或P-gp底物甲氨蝶呤或罗丹明孵育,发现MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够显著增加甲氨蝶呤或罗丹明的细胞内浓度,表明其外排受到抑制.以上结果表明利用化学合成的siRNA能够显著地抑制细胞MRP2和P-gp的表达和功能,提示细胞干扰模型建立成功.
