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细脚拟青霉多糖对乙醇诱导L-02细胞损伤的保护作用研究
目的 探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)对乙醇诱导肝细胞损伤的体外保护作用.方法 采用RT-PCR分别检测乙醇诱导损伤的乙醇组、PtPs处理组(PtPs+乙醇)及正常对照组L-02细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和热休克蛋白90(HSP90)mRNA的表达;检测细胞培养上清液中黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量;检测细胞匀浆中三磷酸腺苷酶(ATPase)活性,并对各组细胞进行Annexin-FITC标记染色观察凋亡细胞情况.结果 与乙醇组比较,乙醇+PtPs组细胞内TNF-α mRNA表达下降(P＜0.01),HSP90 mRNA表达增加(P＜0.05或P＜0.01);细胞培养上清液中SOD活性升高、XOD及LDH活性下降、MDA含量下降(P＜0.05或P＜0.01);细胞匀浆中ATPase活性上升(P＜0.05或P＜0.01);PtPs处理后可见乙醇诱导的L-02细胞凋亡和坏死被明显抑制.结论 PtPs对乙醇诱导肝细胞的损伤具有保护作用.
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细脚拟青霉提取物对D-半乳糖致衰小鼠免疫功能的影响
目的 研究细脚拟青霉提取物对D-半乳糖致衰小鼠免疫功能的调节作用.方法 以D-半乳糖制备衰老小鼠模型,同时用低、中、高三种不同剂量的细脚拟青霉提取物进行灌胃30 d后,计算胸腺指数和脾脏指数,用MTT法检测小鼠脾T、B淋巴细胞转化指数SI,用中性红试验检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,用ELISA法检测IL-2的水平.结果 D-半乳糖致衰小鼠免疫功能明显下降,各剂量组均能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.01);中、高剂量细脚拟青霉提取物能够显著提高胸腺指数、脾脏指数、IL-2水平(P<0.01);高剂量细脚拟青霉提取物能够显著提高脾T、B淋巴细胞转化指数SI(P<0.01).结论 细脚拟青霉提取物对D-半乳糖致衰小鼠免疫功能具有一定的调节作用.
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神经网络-遗传算法优化细脚拟青霉多糖超声提取工艺
目的 优化超声波法提取细脚拟青霉胞内多糖.方法 采用单因素法和基于遗传算法的神经网络法(ANN-GA)考察超声功率、超声时间和固液比与细脚拟青霉多糖提取率之间的非线性关系.结果 终佳提取条件为:固液比1:73(g:mL),376 W提取385 s;多糖得率高达2.37％,比未优化之前提取率提高了3倍.结论 ANN-GA法优化细角拟青霉超声波法提取多糖,是有效可行的.
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细脚拟青霉药理及毒理学研究进展
细脚拟青霉是我国重要的虫生药用真菌,因其具有多种药理活性而受到很多学者的广泛关注.文献报道表明,细脚拟青霉具有降血糖、抗抑郁、抗肿瘤、抑菌、免疫调节等多种药理活性.毒理学研究表明,长期服用细脚拟青霉提取物对于肝脏和肾脏有一定损伤,且具有一定致突变性.本文归纳总结细脚拟青霉的药理及毒性表现方面的研究报道,以期为该菌的进一步研究开发提供一些参考.
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细脚拟青霉多糖诱导小鼠巨噬细胞一氧化氮生成和iNOS mRNA的表达
目的 研究单一组分细脚拟青霉多糖(Paecilomyces tenuipes polysaccharide,PTPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其作用机制.方法 应用水提、乙醇沉淀、DEAE-纤维素色谱, 对PTPS进行提取并分级;用CCK-8试剂检测PTPS对小鼠脾细胞的增殖作用,硝酸盐还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量和RT-PCR半定量法检测iNOS mRNA的表达.结果 从细脚拟青霉菌丝体中分离出含糖量为92%的中性多糖PTPS,可促进脾细胞的增殖,并在一定浓度下显示剂量依赖效应;能明显诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成和iNOS mRNA的表达.结论 PTPS通过诱导小鼠巨噬细胞NO合成和iNOS的转录,表明其具有免疫调节和潜在的抗肿瘤活性.
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细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响
目的提取分离细脚拟青霉总多糖(PtPs),探讨其对人外周血单核细胞(PBMC)的调节作用.方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖(LPS)在体外刺激PBMC,酶联免疫法测定TNF-α的水平,溴化四唑蓝法测定增殖活性.结果所得PtPs制品的纯度为76.1%;适当剂量的PtPs(100～500μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF-α的分泌;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性.结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分.
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苯酚-硫酸光度法测定细脚拟青霉多糖的含量
目的:测定细脚拟青霉中多糖的含量.方法:应用苯酚-硫酸光度法测定细脚拟青霉总多糖制品中的糖含量.结果:测定波长为490 nm,在20～200 mg·L-1范围内糖含量与吸光度有良好的线性关系,回归方程为:A=0.007572C+0.06012,r=0.9994.平均回收率为(97.9±1.69)%,RSD=2.70%.测得细脚拟青霉总多糖制品中糖含量为76.10%(n=5).结论:该法操作简便、可靠,样品显色稳定,重现性好,可用于细脚拟青霉多糖含量的测定.
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细脚拟青霉减轻环磷酰胺所致免疫抑制效应的实验研究
目的探讨细脚拟青霉对机体的免疫调节作用.方法用环磷酰胺复制大、小鼠免疫抑制模型,细脚拟青霉灌胃处理正常及免疫抑制大、小鼠21d后处死,并测定其胸腺和脾脏的重量以及外周血白细胞数.结果正常对照组大、小鼠白细胞数分别为(11600±3600)、(4700±1100)×106/L;细脚拟青霉组大鼠白细胞数升高,为(16500±3800)×106/L;环磷酰胺组大、小鼠白细胞数均降低,分别为(5300±1300)、(3000±1500)×106/L;细脚拟青霉加环磷酰胺组大、小鼠白细胞数又回升,分别为(12000±6900)、(4400±1200)×106/L.环磷酰胺组大、小鼠脾脏、胸腺湿重下降,分别为0.86±0.16、0.12±0.06、0.080±0.028、0.010±0.003g;细脚拟青霉加环磷酰胺组大、小鼠脾脏、胸腺湿重又回升,分别为0.99+0.13、0.19±0.05、0.126±0.085、0.015±0.006g.结论细脚拟青霉对正常大鼠有提升白细胞数作用,并能阻止环磷酰胺所致的降低白细胞数作用;对环磷酰胺所致免疫抑制大、小鼠的脾脏、胸腺等免疫器官萎缩有阻遏作用;故细脚拟青霉对机体具有免疫调节活性.
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细脚拟青霉多糖抗乙型肝炎病毒的体外实验研究
目的:探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性.方法:通过CCK-8试剂盒检测PtPs对HepG2.2.15的细胞毒性.以无或低毒浓度的PtPs作用于HepG2.2.15细胞,采用ELISA法检测细胞内和培养上清的HBsAg,HBeAg水平;采用荧光定量PCR法检测细胞内和培养上清中HBV DNA的水平.结果:随着PtPs浓度的增加细胞内的HBeAg和上清中的HBeAg、HBV DNA的水平显著下降.PtPs对细胞内和上清中HBeAg的抑制率高度相关,r=0.994,P＜0.01.PtPs作用24 h后细胞内和上清中的HBeAg的治疗指数分别为5.63和3.30.结论:PtPs在体外对HBeAg和HBV DNA的合成与分泌有抑制作用.
关键词： 细脚拟青霉 多糖 乙型肝炎病毒 HepG2.2.15细胞 -
中药大黄对细脚拟青霉液态发酵菌体生长及产胞内腺苷的影响
目的:研究中药大黄水提液对细脚拟青霉摇瓶液态培养过程中生物量、胞内腺苷的影响.方法:将大黄水提液加入摇瓶基础培养基中接种培养,采用烘干法和HPLC法分别测定生物量和胞内腺苷含量.结果:在摇瓶基础培养基中分别加入30 g/L和35 g/L的大黄水提液能有效提高细脚拟青霉生物量和胞内腺苷产量,高生物量达到18.7 g/L,大胞内腺苷含量达到1.8135 mg/g.在佳添加量下,与对照组相比,细脚拟青霉生物量、胞内腺苷含量分别提高了3.5 g/L和0.3835 mg/g.结论:大黄水提液对细脚拟青霉菌体生长和胞内腺苷的积累具有明显促进作用.
