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艾洛替尼耐药肝癌HepG2细胞系的建立及其耐药机制
目的 体外建立艾洛替尼(erlotinib)耐药的人肝癌细胞系HepG2/erlotinib,鉴定其生物学特性,并对其耐药机制进行初步探讨.方法 逐步递增艾洛替尼并终给予艾洛替尼50μmol·L-1连续冲击HepG2细胞12个月,建立HepG2/erlotinib.磺酰罗丹明B法检测HepG2/erlotinib耐药倍数和耐药谱;测定细胞生长曲线并计算细胞增殖时间;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR和Western印迹法检测HepG2/erlotinib细胞乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞表面BCRP蛋白表达.结果 经过12个月艾洛替尼诱导的HepG2耐药细胞,艾洛替尼的IC50值为(72.3±6.1) μmol·L-1,艾洛替尼对正常HepG2细胞的IC50值为(10.6±0.3) μmol·L-1,耐药倍数为6.8±0.7,表明HepG2/erlotinib为艾洛替尼耐药细胞系.HepG2/erlotinib对顺铂、多柔比星、米托蒽醌和拓扑替康的IC50均大于正常HepG2细胞的IC50,表明产生交叉耐药性.HepG2细胞和HepG2/erlotinib细胞的群体倍增时间分别为(20.7±3.3)h和(26.7±1.2)h,耐药细胞倍增时间延长.与HepG2细胞相比,HepG2/erlotinib的S期细胞比例明显增高(P＜0.05),G0/G1期细胞比例明显降低(P＜0.01);HepG2/erlotinib细胞中BCRP基因和BCRP蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论 建立的HepG2/erlotinib具有耐药细胞的特征和生物学特性,其耐药机制与BCRP蛋白表达增加有关.
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艾洛替尼耐药的卵巢癌SKOV3细胞系的建立及其耐药特性
目的 通过体外建立艾洛替尼(Erl)耐药的人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3/Erl,并探讨其耐药机制,为卵巢癌靶向性治疗的耐药性研究提供细胞模型及依据.方法 采用逐步递增联合大剂量冲击法诱导细胞,取对数生长期的SKOV3细胞,从Erl 1 μmol·L-1开始处理,以Erl 2,4,8,16和 25 μmol·L-1反复换液传代,终维持浓度为10 μmol·L-1,共诱导10个月.取SKOV3和SKOV3/Er1细胞,加入不同浓度艾洛替尼、紫杉醇、米托蒽醌、表柔比星、拓扑替康、长春新碱和甲氨蝶呤等药物,作用72 h,磺酰罗丹明B染色法检测耐药倍数.流式细胞术检测SKOV3细胞和SKOV3/Er1细胞的细胞周期.Western印迹法检测Erl刺激对敏感和耐药细胞中表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路产生的变化;流式细胞术检测SKOV3/Er1细胞表面ATP结合盒(ABC)转运蛋白中P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达以及Toll样受体4(TLR4)的表达;检测脂多糖(LPS)刺激对紫杉醇耐受的SKOV3/Erl细胞的敏感度.结果 Erl对SKOV3细胞的IC50为(9.54±1.04)μmol·L-1,而对SKOV3/Erl细胞的IC50为(21.63±1.05)μmol·L-1,耐药倍数约为2.26,诱导成功的SKOV3/Erl对紫杉醇、长春新碱、米托蒽醌和甲氨蝶呤的耐药倍数均在3倍以上.与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl 细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降,G2/M期几乎无变化.Erl刺激后,与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl细胞中p-HER1,p-ERK与p-AKT水平上调.SKOV3/Erl细胞膜上Pgp,BCRP和MRP1表达有微弱上调,而TLR4显著上调;脂多糖可强烈刺激SKOV3/Erl细胞增殖,并且对紫杉醇杀伤起到保护作用,而亲本细胞则相对不敏感.结论 成功建立了对Erl耐受的人卵巢癌耐药细胞SKOV3/Erl.其表现出的多药耐药机制可能与TLR4蛋白表达上调有关.
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第二代ALK抑制剂治疗ALK+非小细胞肺癌有效性单组率的Meta分析
目的 系统评价第二代ALK抑制剂(色瑞替尼和艾洛替尼)治疗ALK+非小细胞肺癌的疗效及颅内病灶控制效果.方法 计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、ClinicalTrials.gov、WanFang Data和VIP数据库,搜集色瑞替尼或艾洛替尼治疗ALK+非小细胞肺癌的临床研究,检索时限为建库至2017年12月31日.由2位评价员独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用Stata 12.0软件进行Meta分析.结果 共纳入11个研究.Meta分析结果显示:色瑞替尼和艾洛替尼治疗非小细胞肺癌的客观缓解率(ORR)为57％[95％CI (0.48,0.66),P＜0.001];对于克唑替尼耐药患者,ORR为51％[95％CI (0.44,0.57),P＜0.001];对于存在脑转移的患者,其颅内病灶控制率(IDCR)为78％[95％CI (0.71,0.86),P＜0.001].结论 第二代ALK抑制剂显示出明显的抗肿瘤效果.受纳入研究质量和数量限制,上述结论仍需更多大样本、高质量研究予以验证.
